[發(fā)明專利]一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法

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• 申請日: 2021-01-21
• 公開（公告）號: CN112851801A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐智盼;黃芳
• 申請（專利權(quán)）人: 南京基蛋生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C07K14/805
• 分類號: C07K14/805;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/20;G01N33/72
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1.一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，所述的抗原為肌紅蛋白，該肌紅蛋白制備采用純化天然豬源肌紅蛋白，具體依次包括以下步驟：豬心組織勻漿、硫酸銨沉淀、離子交換層析和疏水層析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，離子交換層析過程中平衡和洗脫采用的試劑都是Tris-EDTA緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，離子交換層析過程中平衡和洗脫采用的試劑為10-100mM Tris，1-5mM EDTA，pH7.0-9.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，離子交換層析前，將硫酸銨沉淀獲得粗提蛋白進(jìn)行復(fù)融、透析和膜過濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，疏水層析平衡和洗脫所用的試劑由Tris -EDTA緩沖液和硫酸銨鹽組成，洗脫所用試劑硫酸鹽的濃度為平衡所用試劑硫酸鹽鹽濃度的0.25-0.75倍。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，疏水層析平衡所用的試劑為10-100mM Tris，1-5 mM EDTA，2-3M硫酸銨，pH7.0-9.0, 疏水層析洗脫所用的試劑為10-100mM Tris，1-5 mM EDTA，0.5-1.5 M硫酸銨，pH7.0-9.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，疏水層析前，將離子交換層析獲得的較純肌紅蛋白樣品透析。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，硫酸銨沉淀包括以下步驟：

S21、將豬心組織勻漿獲得上清液經(jīng)70%硫酸銨沉淀，棄沉淀，得上清；

S22、將步驟S21得到上清液經(jīng)100%硫酸銨沉淀，棄上清，取沉淀，獲得粗提蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種化學(xué)發(fā)光免疫分析校準(zhǔn)品或質(zhì)控品用抗原的制備方法，其特征在于，所述的豬心組織勻漿具體步驟：取豬心組織，制成勻漿狀，離心，取上清，獲得豬心組織勻漿上清液。