[發(fā)明專利]一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110075741.6
• 申請日: 2021-01-20
• 公開（公告）號: CN112680509A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷震;吳鴻;高水波;高海霞;王新洲;秦楠;尹悅
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省中醫(yī)院（河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京冠榆知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

本發(fā)明公開評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR?302e及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用，評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR?302e核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，逆轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2所示，擴(kuò)增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物為序列表中SEQ ID No.3和SEQID No.4所示，評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR?302e在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用。miR?302e作為評估冠心病預(yù)后新的分子標(biāo)志物，可評估冠心病預(yù)后，并對冠心病患者進(jìn)行治療，延長患者生存時(shí)間，提高生存率，是冠心病上的一大創(chuàng)新，經(jīng)濟(jì)和社會效益巨大。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及心血管病分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。具體地說是一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)已成為我國城鄉(xiāng)居民第一大死亡原因，2016年統(tǒng)計(jì)表明CVD死亡率仍居各病之首，高于腫瘤及其他疾病，農(nóng)村為45.01％，城市為42.61％，且我國CVD患病率及死亡率仍處于上升階段。

微小RNA(microRNA或miRNA)是一類約22個核苷酸組成的小分子非編碼RNA，通過與靶基因轉(zhuǎn)錄生成的mRNA 3’端非翻譯區(qū)(3’untranslated region，3’UTR)結(jié)合后，于轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控該基因的表達(dá)及功能，廣泛參與各種生理病理過程。miRNAs在心血管疾病中的表達(dá)、功能、作用機(jī)制研究是近年來國內(nèi)、外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。

研究發(fā)現(xiàn)微小RNA-302e(miR-302e)在血小板、血漿中均高表達(dá)，主要參與調(diào)控血小板、內(nèi)皮細(xì)胞功能，在血栓性CVD的發(fā)生、發(fā)展的病理生理過程中起著非常重要的作用，可作為評估血小板活化以及抗血小板藥物療效及冠心病(coronray heart disease，CHD)預(yù)后的新型生物學(xué)標(biāo)記物。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用，可有效解決制備評估冠心病預(yù)后的試劑盒的問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e，為非編碼RNA，其轉(zhuǎn)錄本長度為17個核苷酸，該核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e的逆轉(zhuǎn)錄引物，逆轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2所示。

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e的擴(kuò)增引物，擴(kuò)增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物為序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用。

上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用，所述的評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒包括：上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e的逆轉(zhuǎn)錄引物、上述特異性擴(kuò)增引物、內(nèi)參基因U6表達(dá)的特異性擴(kuò)增引物序列，其上游引物和下游引物序列為序列表中SEQ ID No.5和SEQ IDNo.6、從血漿中提取miRNA以及進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR的試劑。

上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物miR-302e在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用，所述的評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒包括：

(1)從冠心病或健康者中抽提總RNA所用試劑：包括Trizol液20mL、氯仿80mL、異丙醇80mL、抑制RNA降解溶劑40mL、體積分?jǐn)?shù)為75％的乙醇30mL，DEPC水10mL；