[發明專利]一種評估冠心病預后分子標志物miR-302e及其逆轉錄引物、擴增引物和應用

在審

• 申請號: 202110075741.6
• 申請日: 2021-01-20
• 公開（公告）號: CN112680509A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 雷震;吳鴻;高水波;高海霞;王新洲;秦楠;尹悅
• 申請（專利權）人: 河南省中醫院（河南中醫藥大學第二附屬醫院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

1.一種評估冠心病預后分子標志物miR-302e，其特征在于，為非編碼RNA，其轉錄本長度為17個核苷酸，該核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

2.一種評估冠心病預后分子標志物miR-302e的逆轉錄引物，其特征在于，逆轉錄引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2所示。

3.一種評估冠心病預后分子標志物miR-302e的擴增引物，其特征在于，擴增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物為序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

4.如權利要求1所述的評估冠心病預后分子標志物miR-302e在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用。

5.根據權利要求4所述的評估冠心病預后分子標志物miR-302e在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述的評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒包括：權利要求2所述的評估冠心病預后分子標志物miR-302e的逆轉錄引物、權利要求3所述特異性擴增引物、內參基因U6表達的特異性擴增引物序列，其上游引物和下游引物序列為序列表中SEQ ID No.5和SEQ ID No.6、從血漿中提取miRNA以及進行逆轉錄和熒光定量PCR的試劑。

6.根據權利要求5所述的評估冠心病預后分子標志物miR-302e在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述的評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒包括：

(1)從冠心病或健康者中抽提總RNA所用試劑：包括Trizol液20mL、氯仿80mL、異丙醇80mL、抑制RNA降解溶劑40mL、體積分數為75％的乙醇30mL，DEPC水10mL；

(2)以總RNA為模板進行逆轉錄所用試劑：包括評估冠心病預后分子標志物miR-302e的逆轉錄引物：濃度為10μM，30μL；內參基因U6的下游引物：濃度為10μM，30μL；逆轉錄反應緩沖液5×RT Buffer 150μL；逆轉錄酶M-MLV濃度200U/μL，50μL；

(3)將cDNA實時定量PCR：包括miRNA-302e實時熒光定量PCR特異性引物：濃度均為3μM，各25μL；內參基因U6表達的特異性擴增引物：濃度均為3μM，各25μL；實時熒光定量SYBR染料SYBR Green qPCR Mix 500μL；無RNA酶的水25μL。

7.根據權利要求5所述的評估冠心病預后分子標志物miR-302e在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒的檢測方法為：

(1)血漿RNA的抽提；

(2)miRNA-302e RNA的逆轉錄；

(3)利用miRNA-302e的特異性引物進行實時定量PCR；

(4)miRNA-302e表達量的數據分析：采用相對定量方法2^-△△Ct法。