[發(fā)明專利]一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110075722.3
• 申請日: 2021-01-20
• 公開（公告）號: CN112746103A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓勇軍;吳鴻;高水波;王新洲;高海霞;常紅波;劉珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省中醫(yī)院（河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京冠榆知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

本發(fā)明公開評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用，評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示，逆轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2所示，上游引物和下游引物為序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示，評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用。通過檢測冠心病患者血漿中NFIA mRNA的表達(dá)水平，可以對冠心病患者做出預(yù)后檢查診斷，準(zhǔn)確率高達(dá)92％以上，并進(jìn)行及時(shí)治療，降低患者復(fù)發(fā)率和生存質(zhì)量，具有深遠(yuǎn)的臨床應(yīng)用意義和推廣應(yīng)用價(jià)值，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及心血管病分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。具體地說是一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)已成為我國城鄉(xiāng)居民第一大死亡原因，2016年統(tǒng)計(jì)表明CVD死亡率仍居各病之首，高于腫瘤及其他疾病，農(nóng)村為45.01％，城市為42.61％，且我國CVD患病率及死亡率仍處于上升階段。微小RNA(microRNA或miRNA)是一類約22個(gè)核苷酸組成的小分子非編碼RNA，通過與靶基因轉(zhuǎn)錄生成的mRNA 3’端非翻譯區(qū)(3’untranslated region，3’UTR)結(jié)合后，于轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控該基因的表達(dá)及功能，廣泛參與各種生理病理過程。miRNAs在心血管疾病中的表達(dá)、功能、作用機(jī)制研究是近年來國內(nèi)、外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)微小RNA-223(miRNA-223)在血小板、血漿中均高度表達(dá)，主要參與調(diào)控血小板、內(nèi)皮細(xì)胞功能，在血栓性CVD的發(fā)生、發(fā)展的病理生理過程中起著非常重要的作用，可作為評估血小板活化以及抗血小板藥物療效及冠心病(coronray heartdisease，CHD)預(yù)后的新型生物學(xué)標(biāo)記物。

NFIA是NFI家族(NFIA、NFIB、NFIC、NFIX)的成員之一，可以通過同二聚體形式或者家族內(nèi)部成員之間結(jié)合形成的異二聚體形式結(jié)合，也可與半識別位點(diǎn)TTGGC或GCCAA以低親和力結(jié)合，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。在人粒細(xì)胞分化過程中miR-223可作用于NFIA轉(zhuǎn)錄后翻譯，抑制其表達(dá)。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)Dami細(xì)胞在PMA的誘導(dǎo)下，miR-223表達(dá)顯著升高，而NFIA和p65的表達(dá)明顯降低，以上提示miR-223可能通過靶向調(diào)控NFIA表達(dá)介導(dǎo)NFκB通路，進(jìn)而調(diào)控血栓形成及炎癥反應(yīng)。但是，目前NFIA在CVD病理生理過程中的具體作用機(jī)制也亟需更多、更深層挖掘驗(yàn)證。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA及其逆轉(zhuǎn)錄引物、擴(kuò)增引物和應(yīng)用，可有效解決制備評估冠心病預(yù)后的試劑盒的問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA，為非編碼RNA，其轉(zhuǎn)錄本長度為140個(gè)核苷酸，該核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA的逆轉(zhuǎn)錄引物，逆轉(zhuǎn)錄引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2所示。

一種評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA的擴(kuò)增引物，擴(kuò)增引物包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物為序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用。

上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA在制備評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒中的應(yīng)用，所述的評估冠心病預(yù)后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測試劑盒包括：上述評估冠心病預(yù)后分子標(biāo)志物NFIA的逆轉(zhuǎn)錄引物、上述特異性擴(kuò)增引物、內(nèi)參基因18S表達(dá)的特異性擴(kuò)增引物序列，其上游引物和下游引物序列為序列表中SEQ ID No.4和SEQ ID No.5、從血漿中提取miRNA以及進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR的試劑。