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[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)β-胡蘿卜素的解脂耶氏酵母及其應(yīng)用有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202110075231.9 申請日: 2021-01-20
公開(公告)號: CN112831427B 公開(公告)日: 2022-08-23
發(fā)明(設(shè)計)人: 祁慶生;侯進(jìn);劉萌萌;張瑾 申請(專利權(quán))人: 山東大學(xué)
主分類號: C12N1/19 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P23/00;C12R1/645
代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 代理人: 李箏
地址: 266237 *** 國省代碼: 山東;37
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 高產(chǎn) 胡蘿卜素 解脂耶氏 酵母 及其 應(yīng)用
【權(quán)利要求書】:

1.一株解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)GVD-A,所述菌株已于2020年10月20日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,簡稱CCTCC,地址為:中國武漢.武漢大學(xué),其生物保藏號為:CCTCC NO:M 2020595。

2.權(quán)利要求1所述解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)GVD-A作為β-胡蘿卜素生產(chǎn)工程菌的應(yīng)用。

3.一種菌劑,其特征在于,所述菌劑包括權(quán)利要求1所述的解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)GVD-A。

4.權(quán)利要求1所述解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)GVD-A,和/或權(quán)利要求3所述菌劑在食品工業(yè)、飼料工業(yè)、醫(yī)藥及化妝品工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1所述解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)GVD-A的構(gòu)建方法,其特征在于,以解脂耶氏酵母菌株(Yarrowia lipolytica)作為出發(fā)菌株,制備所述解脂耶氏酵母菌株(Yarrowia lipolytica)的潮霉素、尿嘧啶及亮氨酸營養(yǎng)缺陷型,所述營養(yǎng)缺陷型菌株中的β-氧化酶缺失,同時過表達(dá)CarB、CarRP、GGPP合成酶GPS、IDI、血紅蛋白VHb、GGS1及MVA途徑相關(guān)酶,最后對β-氧化酶進(jìn)行敲除;

所述出發(fā)菌株解脂耶氏酵母菌株(Yarrowia lipolytica),其ATCC編號MYA-2613,其基因型為MATAura3-3021leu2-270xpr2-322axp2-deltaNU49XPR2::SUC2;所述β-氧化酶為乙酰CoA連接酶8;基因號為:GenBank:YALI1_B10231g;

乙酰轉(zhuǎn)移酶基因atoB來自大腸桿菌E.coli,基因號為GenBank:b2224;

乙酰CoA乙酰轉(zhuǎn)移酶基因atoBY,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

所述GGPP合成酶GPS基因來自Archaeoglobus;其編號為NC_013741.1;其序列如SEQ IDNO:2所示;

所述CarB和CarRP來自Rhizomucor circinelloides;所述CarB的核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示;所述CarRP的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;

所述MVA途徑相關(guān)激酶包括ERG8、ERG12及ERG19;

所述CarB、CarRP的插入位點(diǎn)為解脂耶氏酵母菌株(Yarrowia lipolytica)基因組的zeta位點(diǎn)處;所述CarRP的拷貝數(shù)為兩個。

6.權(quán)利要求1所述解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)GVD-A的發(fā)酵方法,其特征在于,所述發(fā)酵方法包括采用2XYPD、YPD培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。

7.權(quán)利要求6所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述2X YPD培養(yǎng)基包括4%胰蛋白胨,2%酵母提取物,10%葡萄糖。

8.權(quán)利要求6所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述培養(yǎng)方法如下:將菌液接種于YPD培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間,獲取單克隆在30℃、220rpm條件下?lián)u瓶培養(yǎng)獲得種子液;發(fā)酵培養(yǎng)階段,溫度為30℃,通氣量為2.0VVM,溶氧設(shè)置為20%,攪拌速度與溶氧偶聯(lián)。

9.權(quán)利要求6所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述培養(yǎng)方法中,還包括對發(fā)酵裝置中的葡萄糖濃度進(jìn)行檢測,當(dāng)葡萄糖濃度低于10g/L時,進(jìn)行補(bǔ)糖,補(bǔ)至55~65g/L。

10.權(quán)利要求6所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述培養(yǎng)方法中,無需對pH進(jìn)行調(diào)節(jié)。

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