[發明專利]一種利用LAMP技術快速檢測傷寒沙門氏菌的引物組、檢測方法、試劑盒

有效

• 申請號: 202110070992.5
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112725480B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 劉洪濤;葉誠;曹亞楠;鄭軍平;胡海明;楊化冰;張志剛;殷明珠
• 申請（專利權）人: 武漢海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種傷寒沙門氏菌特異性LAMP可視化檢測試劑盒，其特征在于，包括引物組，序列為：SirA-3 F3：CCCGATCGACAGCGGATA

SirA-3 B3：CAATCTGACTGAGCGCCAT

SirA-3 FIP：GAGATAGCCAGCTGCGCCAGCTGACCGTCCATACGGAGAA

SirA-3 BIP：CTCAGGAGGTGGTGAGCGCTCTGTTGAGCGATATCGGAGG

所述引物組靶向序列為SirA基因，U88651.1；

還包括2×LAMP 緩沖液、Bst 2.0 Warmstart DNA聚合酶，10 mM dNTPs，5 M PCR級甜菜堿，20×Eva Green，120 μM HNB；

所述2×LAMP 緩沖液包括40 mM Tris 無酶，20 mM KCl，16 mM的MgSO₄，20 mM (NH₄)₂SO₄，0.2% v:v Tween 20，2.8 mM dNTPs，0.6 M甜菜堿，pH 8.8。

2.一種非診斷目的的傷寒沙門氏菌特異性LAMP可視化檢測方法，其特征在于：LAMP反應體系為25 μL：2×LAMP 緩沖液 12.5 μL，內引物SirA-3 FIP：1 μL，SirA-3 BIP：1 μL，外引物：SirA-3 F3：1 μL，SirA-3 B3：1 μL，HNB：1 μL；Eva Green：1 μL；Bst 2.0 WarmstartDNA聚合酶：1 μL，無酶水：3.5 μL，DNA樣品：2 μL；

序列為：

SirA-3 F3：CCCGATCGACAGCGGATA

SirA-3 B3：CAATCTGACTGAGCGCCAT

SirA-3 FIP：GAGATAGCCAGCTGCGCCAGCTGACCGTCCATACGGAGAA

SirA-3 BIP：CTCAGGAGGTGGTGAGCGCTCTGTTGAGCGATATCGGAGG。

3.根據權利要求2所述的一種非診斷目的的傷寒沙門氏菌特異性LAMP可視化檢測方法，其特征在于：反應條件：65 °C恒溫 45 min，90 °C 2 min 滅活；樣品呈現天藍色為陽性，紫羅蘭色為陰性。

4.根據權利要求3所述的一種非診斷目的的傷寒沙門氏菌特異性LAMP可視化檢測方法，其特征在于：樣品用2-3% 瓊脂糖凝膠電泳檢測出現梯形條帶的為陽性，沒有梯形條帶的為陰性。

5.如權利要求1所述的試劑盒或權利要求2-4任一所述的檢測方法在食品中傷寒沙門氏菌的檢測中的應用。