[發明專利]一種用于擴增西瓜潛隱病毒的引物對及其應用

有效

• 申請號: 202110069899.2
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN113005224B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 趙立群;邱艷紅;徐秀蘭;田文;張海軍;張曉飛;劉慧;溫常龍
• 申請（專利權）人: 北京市農業技術推廣站;北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

本發明公開了一種用于擴增西瓜潛隱病毒基因組片段的引物對，包括第一引物和第二引物；第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；第二引物的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明還公開了包括前述引物對的試劑與試劑盒及其應用。本發明還公開了使用前述引物對檢測待測植物材料是否感染西瓜潛隱病毒的方法以及檢測待測病毒是否為西瓜潛隱病毒的方法。前述引物對檢測西瓜潛隱病毒的敏感性高，特異性好。

技術領域

本發明屬于植物病毒技術領域，涉及生物檢測技術，具體涉及基于一步法RT-PCR技術檢測西瓜潛隱病毒的引物對、RT-PCR試劑、RT-PCR試劑盒及其應用和方法。

背景技術

西瓜潛隱病毒(citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年來在西瓜上新發現的重要病害病毒，是雙分病毒科(Partitiviridae)丁型雙分病毒屬(Deltapartitivirus)的成員。由兩條dsRNA片段組成。其中dsRNA-1全長1603nt，含有一個編碼RdRp的ORF；dsRNA-2全長1466nt，含有一個編碼CP的ORF。該病毒最早是2013年在以色列被發現，2017年在我國河南首次被報道，2019年在北京西瓜上檢出。該病毒可由種子以較高的效率傳遞給后代幼苗，而且大多數西瓜品種的種子均可以傳播該病毒。該病毒在苗期癥狀不明顯，但后期可與多種瓜類病毒如WMV、ZYMV、CGMMV、MABYV、MNSV混合發生，引發植株矮小，葉片畸形等多種癥狀，嚴重危害西瓜產業。鑒于該病毒隱蔽性強，危害大，建立快速、便捷的分子檢測方法，加強該病毒在種子，種苗上的檢測，是目前防控該病毒病害的關鍵。而目前尚缺乏該病毒的特異性和敏感性的引物和檢測方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題為如何檢測西瓜潛隱病毒、或如何檢測待測植物樣本是否感染西瓜潛隱病毒。為了解決上述技術問題，本發明依據RNA1的保守區域RdRP設計特異性引物，可快速、精準、靈敏檢測該病毒。

本發明第一方面提供了一種用于擴增西瓜潛隱病毒基因組片段的引物對，所述引物對包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述第二引物的核酸序列如SEQID NO.2所示；

或者，所述第一引物與所述第二引物是能夠用于擴增如SEQ ID NO.3或SEQ IDNO.4所示核苷酸序列的引物對；

或者，所述第一引物與所述第二引物是能夠用于擴增所述西瓜潛隱病毒的如SEQID NO.3或SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的同源序列的引物對。

本發明第二方面提供了一種用于擴增西瓜潛隱病毒基因組片段的試劑，所述試劑包括本發明第一方面所述的引物對。

在一些實施方式中，所述第一引物與所述第二引物的摩爾比為1:1。

在一些實施方式中，所述試劑還包括反轉錄酶和/或DNA聚合酶。

在一些實施方式中，所述試劑還包括陽性對照樣品，所述陽性對照樣品可以為感染西瓜潛隱病毒的植物葉片，也可以為西瓜潛隱病毒本身，還可以是人工合成的如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列。

本發明第三方面提供了一種用于擴增西瓜潛隱病毒基因組片段的試劑盒，所述試劑盒中含有本發明第一方面所述的引物對或本發明第二方面所述的試劑。

本發明第四方面提供了本發明第一方面所述的引物對、本發明第二方面所述的試劑或本發明第三方面所述的試劑盒在如下a1或a2中的應用：

a1、檢測西瓜潛隱病毒；

a2、制備檢測西瓜潛隱病毒的制劑；

在一些實施方式中，a1是指：

檢測待測植物材料是否感染西瓜潛隱病毒；或