[發(fā)明專利]一種用于擴(kuò)增西瓜潛隱病毒的引物對(duì)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110069899.2
• 申請(qǐng)日: 2021-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN113005224B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙立群;邱艷紅;徐秀蘭;田文;張海軍;張曉飛;劉慧;溫常龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站;北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

1.一種用于擴(kuò)增西瓜潛隱病毒基因組片段的引物對(duì)，所述引物對(duì)由第一引物和第二引物組成；

所述第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述第二引物的核酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.一種用于擴(kuò)增西瓜潛隱病毒基因組片段的試劑，所述試劑包括權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑，其特征在于，所述第一引物與所述第二引物的摩爾比為1:1；

所述試劑還包括反轉(zhuǎn)錄酶和/或DNA聚合酶；

所述試劑還包括陽(yáng)性對(duì)照樣品。

4.一種用于擴(kuò)增西瓜潛隱病毒基因組片段的試劑盒，所述試劑盒中含有權(quán)利要求1所述的引物對(duì)或權(quán)利要求2或3所述的試劑。

5.權(quán)利要求1所述的引物對(duì)、權(quán)利要求2或3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒在如下a1或a2中的應(yīng)用：

a1、檢測(cè)西瓜潛隱病毒；

a2、制備檢測(cè)西瓜潛隱病毒的制劑。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，a1是指：

檢測(cè)待測(cè)植物材料是否感染西瓜潛隱病毒；或

檢測(cè)待測(cè)病毒是否為西瓜潛隱病毒；

a2是指：

制備檢測(cè)待測(cè)植物材料是否感染西瓜潛隱病毒的制劑；或

制備檢測(cè)待測(cè)病毒是否為西瓜潛隱病毒的制劑。

7.一種檢測(cè)待測(cè)植物材料是否感染西瓜潛隱病毒的方法，所述方法包括：

b1、采用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)對(duì)所述待測(cè)植物材料的核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

b2、根據(jù)所述擴(kuò)增的產(chǎn)物確定所述待測(cè)植物材料是否感染西瓜潛隱病毒。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)植物材料為西瓜葉片或西瓜種子。

9.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)植物材料的核酸為所述待測(cè)植物材料的總RNA。

10.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增為RT-PCR擴(kuò)增。

11.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述確定的步驟為：表征所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中的DNA片段，當(dāng)所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中沒(méi)有588bp的DNA片段時(shí)，判定所述待測(cè)植物材料中沒(méi)有感染所述西瓜潛隱病毒；當(dāng)所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有588bp的DNA片段時(shí)，判定所述待測(cè)植物材料中感染了所述西瓜潛隱病毒；

所述表征是通過(guò)對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)現(xiàn)的；

所述PCR擴(kuò)增采用的溫度程序?yàn)椋?/p>

(1)50℃反應(yīng)30min；

(2)94℃反應(yīng)2min；

(3)循環(huán)反應(yīng)；

(4)72℃反應(yīng)10min；

所述循環(huán)反應(yīng)步驟為：94℃反應(yīng)30s；55-56℃反應(yīng)30s；72℃反應(yīng)35s，循環(huán)30次。

12.一種檢測(cè)待測(cè)病毒是否為西瓜潛隱病毒的方法，所述方法包括：

c1、采用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)對(duì)所述待測(cè)病毒樣本的核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

c2、根據(jù)所述擴(kuò)增的產(chǎn)物判斷所述待測(cè)病毒是否感染西瓜潛隱病毒。

13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)病毒樣本的核酸為所述待測(cè)病毒樣本的總RNA。

14.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增為RT-PCR擴(kuò)增。

15.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述確定的步驟為：表征所述擴(kuò)增產(chǎn)物中的DNA片段，當(dāng)所述擴(kuò)增產(chǎn)物中沒(méi)有588bp的DNA片段時(shí)，判定所述待測(cè)病毒樣本不是所述西瓜潛隱病毒；當(dāng)所述擴(kuò)增產(chǎn)物中含有588bp的DNA片段時(shí)，判定所述待測(cè)病毒樣本是所述西瓜潛隱病毒；

所述表征是通過(guò)對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)現(xiàn)的；

所述PCR擴(kuò)增采用的溫度程序?yàn)椋?/p>

(1)50℃反應(yīng)30min；

(2)94℃反應(yīng)2min；

(3)循環(huán)反應(yīng)；

(4)72℃反應(yīng)10min；

所述循環(huán)反應(yīng)步驟為：94℃反應(yīng)30s；55-56℃反應(yīng)30s；72℃反應(yīng)35s，循環(huán)30次。