[發(fā)明專利]一種快速檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1的膠體金試紙條及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110068172.2 | 申請日： | 2021-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN112730829B | 公開（公告）日： | 2022-03-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 辛魯生;于江南;白昌明;王崇明 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;C07K16/08;C07K16/06 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 陳娟 |
| 地址： | 266000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 檢測 牡蠣 皰疹病毒 oshv 膠體 試紙 及其 應用 | ||
本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測牡蠣皰疹病毒(Ostreidherpesvirus1,OsHV?1)的膠體金試紙條方法及其應用。該膠體金試紙條以OsHV?1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作為待檢抗原分子。本發(fā)明快速檢測試紙條特異性強、靈敏度高，待檢樣品制備簡單。本發(fā)明膠體金檢測試紙成本低，無復雜配套試劑，無需另外配置設備；專業(yè)或非專業(yè)人士均可短時上手操作。本發(fā)明快速檢測試紙條方便攜帶及保存，檢測時長短，適合現(xiàn)場快速OsHV?1診斷，能夠滿足一線養(yǎng)殖戶對OsHV?1診斷的需求，具有廣闊的市場應用場景。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測牡蠣皰疹病毒(Ostreidherpesvirus1 ,OsHV-1)的膠體金試紙條方法及其應用。
背景技術(shù)
國際病毒分類委員會 （International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV）2014年發(fā)布的病毒分類報告中，將雙殼貝類牡蠣中發(fā)現(xiàn)的皰疹病毒樣顆粒正式命名為牡蠣皰疹病毒（Ostreid Herpesvirus 1, OsHV-1）， 隸屬皰疹病毒目（Herpesvirales），軟體動物皰疹病毒科（Malacoherpesviridae）。19世紀70年代我國山東地區(qū)養(yǎng)殖扇貝大規(guī)模死亡與此類病毒感染直接相關(guān)，據(jù)法國海洋開發(fā)研究院報道，2008 年法國境內(nèi)牡蠣養(yǎng)殖業(yè)因 OsHV-1 感染遭遇了毀滅性危機。法國科學家奎昆和米塔等率領(lǐng)團隊，闡明了困擾牡蠣養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)幾十余年夏季牡蠣死亡綜合征正是由此類病毒感染誘發(fā)細菌二次感染造成。近些年貝類流行病學調(diào)查研究表明，我國蚶科養(yǎng)殖貝類正頻繁遭受此類病毒侵襲，導致蚶科養(yǎng)殖群體大規(guī)模死亡。建立現(xiàn)場準確、快速的檢測方法可有效監(jiān)控此類病毒的流行情況，有效提示養(yǎng)殖戶盡快采取應對措施，減少因此類病毒感染帶來的經(jīng)濟損失。
目前對于OsHV-1的檢測，均基于對病毒核酸水平的檢測。利用C2/C6（5’CTCTTTACCATGAAGATACCCACC3’/5’ GTGCACGGCTTACCATTTTT 3’）引物進行普通PCR擴增檢測或通過該引物對制備探針進行原位雜交檢測；利用BF/B4（5’GTCGCATCTTTGGATTTAACAA 3’/5’ ACTGGGATCCGACTGACAAC 3’）引物進行熒光定量PCR檢測。現(xiàn)有基于核酸水平檢測方法靈敏度雖高，但假陽性率也高，并且對操作水平要求高，需要配套至少恒溫水浴或金屬浴設備，檢測周期較長，現(xiàn)有方法均無法實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的目的，即便后期潛在待開發(fā)的基于LAMP等恒溫擴增方法，同樣存在假陽性率高，繁瑣的核酸樣品制備流程等問題。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的主要目的在于提供一種現(xiàn)場方便、快捷、準確的檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1膠體金試紙條。
本發(fā)明還提供了一種上述膠體金試紙條的應用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
本發(fā)明提供了一種快速檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1的膠體金試紙條，所述膠體金試紙條以OsHV-1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作為待檢抗原分子。
本發(fā)明制備的膠體金試紙條包括底板和吸附層；所述吸附層從加樣端開始依次為樣品墊、膠體金標記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。其中，樣品墊及膠體金標記墊由玻璃纖維棉制成；膠體金標記墊上吸附有膠體金標記的抗OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗體mPcAb；硝酸纖維素膜上設有質(zhì)控線C，以及檢測線T；吸水墊由吸水濾紙制成。
進一步的，所述OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗體mPcAb具體制備方法如下：
（1）分別原核表達蛋白序列如SEQ ID NO.1所示的p21重組蛋白，及蛋白序列如SEQID NO.2所示的p25重組蛋白，經(jīng)Ni離子柱和分子篩進行純化；
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