[發(fā)明專利]一種快速檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1的膠體金試紙條及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110068172.2
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112730829B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設計）人: 辛魯生;于江南;白昌明;王崇明
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;C07K16/08;C07K16/06
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 陳娟

1.一種快速檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1的膠體金試紙條，其特征在于，所述膠體金試紙條以OsHV-1膜分子蛋白p21，如SEQ ID NO.1所示和p25，如SEQ ID NO.2所示作為待檢抗原分子；

所述膠體金試紙條包括底板和吸附層；所述吸附層從加樣端開始依次為樣品墊、膠體金標記墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；其中，樣品墊及膠體金標記墊由玻璃纖維棉制成；膠體金標記墊上吸附有膠體金標記的抗OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗體mPcAb；硝酸纖維素膜上設有質(zhì)控線C，以及檢測線T；吸水墊由吸水濾紙制成；

所述OsHV-1膜分子蛋白 p21和 p25蛋白的混合多克隆抗體mPcAb具體制備方法如下：

（1）分別原核表達蛋白序列如SEQ ID NO.1所示的p21重組蛋白，及蛋白序列如SEQ IDNO.2所示的p25重組蛋白，經(jīng)Ni離子柱和分子篩進行純化；

（2）取上述重組p21和p25蛋白分別進行動物免疫；

（3）利用辛酸-硫酸銨沉淀法純化獲得p21和p25各自對應的多克隆抗體IgG，p25與p21蛋白對應的抗體等體積混合后做為混合多克隆抗體mPcAb。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述動物免疫時每只兔的免疫劑量為800μg重組蛋白，免疫次數(shù)5次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述多克隆抗體IgG的ELISA效價為1:10³~1:10⁶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述質(zhì)控線C含有羊抗或鼠抗兔IgG抗體；所述檢測線T含有抗OsHV-1 p21和p25蛋白的混合多克隆抗體mPcAb。

5.一種如權(quán)利要求1-4任一項所述的膠體金試紙條在非診斷目的檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1中的應用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于，所述膠體金試紙條的使用方法包括如下步驟：

（1）采集待檢貝類外套膜樣品，加入組織裂解液研磨或搗碎組織，得到待檢溶液；

（2）將待檢溶液滴入OsHV-1快速膠體金檢測試紙條樣品墊處，水平放置3~5min觀察結(jié)果；

（3）若硝酸纖維素膜處質(zhì)控線C和檢測線T顯現(xiàn)兩條紅棕色條帶，表示待檢樣品中含有OsHV-1 p21蛋白或p25蛋白；若僅質(zhì)控線C顯現(xiàn)一條紅棕色條帶，表示待檢樣品中未檢出OsHV-1 p21和p25蛋白抗原；若檢測試紙條未顯現(xiàn)任何條帶表明檢測操作不當或試紙條失效。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于，所述組織裂解液包括0.1M Tris-HCl，0.5%Tween20，1.5% TritonX-100，0.03% NaN₃。