[發明專利]一種產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶及應用

有效

• 申請號: 202110067678.1
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112852794B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 張輝;包紅朵;周艷;王冉;龐茂達
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/51;A61P1/00;A61P29/00;C12R1/19
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 崔玥

本發明提供了一種產氣莢膜梭菌噬菌體(Clostridiumperfringensphage)裂解酶及其作為抗菌物質在禽壞死性腸炎預防和食品污染控制中的應用，屬于生物工程領域。本發明產氣莢膜菌噬菌體裂解酶的氨基酸序列為SeqIDNO.2。利用生物工程技術開發能夠高效殺滅產氣莢膜梭菌的酶制劑，該制劑可以單獨或復配使用，能夠特異性的滅活產氣莢膜梭菌，為目前防治禽壞死性腸炎和控制食品中產氣莢膜梭菌污染提供一種安全、無毒副作用的酶制劑來源。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，尤其涉及一種產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶及應用。

背景技術

產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens，Cp)是一種重要的人畜共患病原菌，不僅可以導致家禽的壞死性腸炎(NE)，給養殖業造成巨大的經濟損失，還能夠引起食物中毒，給人類健康帶來巨大威脅。隨著抗生素的廣泛使用，產氣莢膜梭菌對抗生素的耐藥性不斷增強，多重耐藥現象明顯，嚴重影響了抗生素的臨床治療效果。家禽是產氣莢膜梭菌的主要宿主，其屠宰加工過程中往往會被產氣莢膜梭菌污染，然而誤食產氣莢膜梭菌污染的食物能夠引發食物中毒，可損傷細胞膜、血管內皮細胞并使糖類分解，導致細胞壞死、組織水腫、充氣等病變，嚴重會導致死亡。

噬菌體是一類細菌依賴性的病毒，又稱細菌病毒。裂解性噬菌體感染細菌后，可在宿主菌內快速增殖，并使之裂解，故又稱毒性噬菌體。裂解酶是雙鏈DNA噬菌體所特有的，是在感染宿主晚期由噬菌體表達的一類肽糖水解酶，該酶通過水解細菌細胞壁肽糖上糖與肽間的酰胺鍵或肽內氨基酸殘基間的連鍵最終使宿主細胞裂解。裂解酶不僅特異性作用于宿主，且作用時間短，作用譜較噬菌體廣。裂解酶具有高效、特異且不產生抗性等特點，目前在食品及醫藥行業已有成功應用的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶及應用，該裂解酶能夠特異性的滅活產氣莢膜梭菌，防治禽壞死性腸炎和控制食品中產氣莢膜梭菌污染。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

一種產氣莢膜梭菌噬菌體(Clostridium perfringens phage)裂解酶，所述裂解酶氨基酸序列為Seq ID NO.2；核苷酸序列為Seq ID NO.1。

優選的是，擴增所述裂解酶核苷酸的引物為：5’-ATT GGA TCC ATG CTG CTG ATTAAC TGC-3’和5’-CTT AAG CTT TAA TTC AAC ACC TTT ATG TTT-3’。

一種含有產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶核苷酸序列的質粒。

一種含有產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶核苷酸序列的質粒的重組菌。

優選的是，所述重組菌的原核細胞表達載體為pET28a；裂解酶基因插入到pET28a的Bam H I和Hind III酶切位點之間；重組菌菌為DE3(pET-Cps-Z1)。

產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶在制備防治禽壞死性腸炎藥物的應用。

產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶在抑制食品產氣莢膜梭菌污染或過度生長的應用。

優選的是，所述食品為由肉類，或蛋類，或奶制品，或糧食，或蔬菜，或它們之間的組合加工的固體或液體類食品。

優選的是，將裂解酶與賦形劑復配后，用來抑制食品中產氣莢膜梭菌的污染或過度生長。

相對于現有技術，本發明具有如下有益效果：

利用生物工程技術開發能夠高效殺滅產氣莢膜梭菌的酶制劑，該制劑可以單獨或復配使用，能夠特異性滅活產氣莢膜梭菌，為目前防治禽壞死性腸炎及控制食品中產氣莢膜梭菌污染提供一種安全、無毒副作用的酶制劑來源。

附圖說明

圖1：裂解酶Cps-Z1表達產物的鑒定分析；