[發(fā)明專利]一種同時檢測兩種水溶性真菌毒素試紙條制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110066465.7 | 申請日： | 2021-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN112881679A | 公開（公告）日： | 2021-06-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃志兵;謝建華;黃馨雨 | 申請（專利權(quán)）人： | 南昌大學 |
| 主分類號： | G01N33/558 | 分類號： | G01N33/558;G01N33/543;G01N33/577 |
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| 地址： | 330000 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同時 檢測 水溶性 真菌 毒素 試紙 制備 方法 | ||
本發(fā)明涉及真菌毒素的快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測兩種水溶性真菌毒素試紙條制備方法。本發(fā)明制備的試紙條所用的抗體標記物為花狀納米金和球形膠體金，兩種真菌毒素的檢測靈敏度均為5ng/mL，可以將樣品稀釋200倍，排除基質(zhì)干擾，實現(xiàn)樣品中兩種水溶性真菌毒素的快速檢測。該試紙條將適用于食品加工企業(yè)、質(zhì)檢部門和飼料企業(yè)等，具有廣泛市場應(yīng)用前景。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及真菌毒素的快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測兩種水溶性真菌毒素試紙條制備方法。
背景技術(shù)
真菌毒素的污染是食品安全領(lǐng)域內(nèi)較為突出的問題之一，據(jù)聯(lián)合國糧食與農(nóng)業(yè)組織(FAO)報告，全球約有25％的農(nóng)作物遭受霉菌及其毒素污染，約有2％的農(nóng)作物因污染嚴重而失去營養(yǎng)和經(jīng)濟價值。對人類危害嚴重的真菌毒素主要有十幾種，其中包括黃曲霉毒素B1(AFB1)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DO N)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素、伏馬菌素B1(FB1)、桔霉素、展青霉毒素等。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是鐮刀菌產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物—單端孢霉烯族化合物中的一種，屬于B型單端孢霉烯族化合物。伏馬菌素B1(Fumonisin FB1)是另外一種霉菌毒素，是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物。上述兩種真菌毒素廣泛存在于谷物糧食及其制品中，具有致畸、致癌、免疫抑制毒性、神經(jīng)毒性等作用，它們不僅造成農(nóng)作物減產(chǎn)、質(zhì)量下降等巨大的經(jīng)濟損失，而且對人、畜的健康構(gòu)成潛在的威脅。
目前，國內(nèi)外對真菌毒素常用的檢測方法主要高效液相色譜法(HPLC)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELIS A)等，其中儀器檢測方法具有準確可靠、高效、靈敏度高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點，但現(xiàn)有的檢測方法耗費時間長、成本高、相關(guān)設(shè)備條件復雜，只適合于實驗室檢測，因此無法進行大范圍推廣。ELISA具有操作相對簡單、靈敏度高等優(yōu)點，但也存在需要專門儀器，需要專業(yè)人員操作和耗時較長等缺點，也只適合于實驗室檢測。相比之下，膠體金免疫層析法具有簡單快速、無需復雜設(shè)備和專業(yè)知識，操作人員5分鐘即能學會，即學即用。
本發(fā)明制備的試紙條所用的抗體標記物為花狀納米金和球形膠體金，兩種真菌毒素的檢測靈敏度均為5ng/mL，可以將樣品稀釋200倍，排除基質(zhì)干擾，實現(xiàn)樣品中兩種水溶性真菌毒素的快速檢測。該試紙條將適用于食品加工企業(yè)、質(zhì)檢部門和飼料企業(yè)等，具有廣泛市場應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的快速、同時檢測兩種水溶性真菌毒素的試紙條包括硝酸纖維素膜(NC膜)、結(jié)合物釋放墊、樣品墊、底板和吸水墊，NC膜噴涂了DON-BSA和FB1-BSA偶聯(lián)物的測試區(qū)(T線)和包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控區(qū)(C線)，所述金標墊噴涂了DON單克隆抗體偶聯(lián)金花納米顆粒(藍色)和FB1單克隆抗體偶聯(lián)了球形膠體金(紅色)。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種同時檢測兩種水溶性真菌毒素試紙條的制備方法，所述方法包括以下步驟：
(1)DON單克隆抗體-花納米顆粒標記物和FB1單克隆抗體-15-18nm球形納米金標記物標記物的制備
在磁力攪拌下，向盛有3mL 15-18nm球形金花納米溶液或膠體金溶液中加入K2CO3溶液調(diào)節(jié)溶液的pH為5.0-6.5，分別取DON抗體和FB1抗體各5-10μL，稀釋后，逐漸加入到金花納米溶液或膠體金溶液中，反應(yīng)60min，然后分別加入BSA和PEG-20000，反應(yīng)30min后，10000rpm離心60min，沉淀用金子稀釋液復溶，得到DON單克隆抗體-花納米顆粒標記物，同時按照同樣的方法制備二抗與膠體金和金花復合物，用于信號放大；
(2)金標結(jié)合物釋放墊的處理
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