[發明專利]EB病毒NA1-IgA抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202110065996.4
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112903998B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 王勝嵐;涂妮娜;黃永宏;彭永林
• 申請（專利權）人: 中山生物工程有限公司;派恩特（中山）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/31
• 代理公司: 中山市捷凱專利商標代理事務所(特殊普通合伙) 44327
• 代理人: 楊連華

本申請提供一種EB病毒NA1?IgA抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法，包括有酶結合物、樣品稀釋液、陰性對照液、質控血清液、底物A液、底物B液、終止液、濃縮洗滌液，以及包被板，包被板上包被有EB病毒NA1重組抗原，酶結合物為辣根過氧化物酶標記的抗人IgA，使用純化基因重組EB病毒NA1包被的微孔板和酶標抗人lgA及其它試劑制成，利用ELISA間接法原理定性檢測人血清中的EB病毒NA1IgA抗體，具有靈敏度高、特異性強、抗干擾能力強的優點，同時本申請結構簡單、檢測成本低、準確性好。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及EB病毒NA1-IgA抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法，具體地說是一種利用間接法原理的酶聯免疫法實現定性檢測人血清中EB病毒核抗原1(NA1)的IgA抗體。

背景技術

EB病毒是嗜人類B淋巴細胞的γ皰疹病毒，主要侵犯B淋巴細胞，對人的B淋巴細胞、上皮細胞(包括腮腺管、咽以及宮頸等)和腺細胞有親和力。目前的研究發現EB病毒感染與多種人類腫瘤如鼻咽癌、淋巴癌等相關。NA1(NuclearAntigen1)是EB病毒核抗原，所有EB病毒感染和轉化的B細胞核內都可以檢出這種核抗原。

現有用于EB病毒核抗原1(NA1)的IgA抗體的檢測試劑存在靈敏度低、特異性差、抗干擾能力弱的缺點，時常出現試劑診斷假陰性、假陽性的困擾，這不僅困擾著診斷環節，也存在于康復環節，沒有精準的診斷難以有精準的治療，因此如何精準地篩查病例，是亟需解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度高、特異性強、抗干擾能力強的EB病毒NA1-IgA抗體酶聯免疫檢測試劑盒。

本發明的另一個目的是提供一種EB病毒NA1-IgA抗體酶聯免疫測試方法。

本發明提供技術方案如下：一種EB病毒IgG抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括酶結合物、樣品稀釋液、陰性對照液、質控血清液、底物A液、底物B液、終止液、濃縮洗滌液，以及包被板；

所述包被板上包被有EB病毒NA1重組抗原；

所述酶結合物為辣根過氧化物酶標記的抗人IgA。

本申請提供一種EB病毒NA1-IgA抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括有酶結合物、樣品稀釋液、陰性對照液、質控血清液、底物A液、底物B液、終止液、濃縮洗滌液，以及包被板，包被板上包被有EB病毒NA1重組抗原，酶結合物為辣根過氧化物酶標記的抗人IgA，使用純化基因重組EB病毒核抗原1(NA1)包被的微孔板和酶標抗人IgA及其它試劑制成，利用ELISA間接法原理定性檢測人血清中的EB病毒核抗原1(NA1)的IgA抗體，具有靈敏度高、特異性強、抗干擾能力強的優點，對EB病毒VCA IgA陽性、EB病毒VCA IgM陽性、EB病毒Zta IgA陽性樣本具有很好特異性，對巨細胞、單純皰疹病毒1型、Ⅱ型、肝癌、腸癌、頭頸癌、肺癌、淋巴瘤疾病等疾病無明顯交叉反應，干擾物質(如高脂血、高膽紅素、溶血、枸櫞酸鈉抗凝血、EDTA-2Na抗凝血樣本)不干擾本產品檢測，同時本申請結構簡單、檢測成本低、準確性好。

作為本發明的進一步改進，所述EB病毒NA1重組抗原采用基因工程技術制備。本申請的所述EB病毒NA1重組抗原具有靈敏度高、特異性好的優點。

作為本發明的進一步改進，所述EB病毒NA1重組抗原采用以下方法制備：選擇EB病毒NA1(開放讀碼框架BKRF1)蛋白的后237個氨基酸部分作為靶抗原，以EB病毒NA1相應的mRNA序列為模板，通過RT-PCR獲得目的基因片段，然后轉入pGEX-2T基因融合表達系統，經酶切測序鑒定后，將重組菌落用IPTG誘導表達，表達產物經GST親和層析純化，用凝血酶切去GST部分，最終得到所述EB病毒NA1重組抗原。優選EB病毒NA1 DNA序列共有714個堿基對，237個氨基酸，本申請的包被抗原具有靈敏度高、特異性好的優點。