[發(fā)明專(zhuān)利]EB病毒NA1-IgA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110065996.4
• 申請(qǐng)日: 2021-01-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112903998B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王勝嵐;涂妮娜;黃永宏;彭永林
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中山生物工程有限公司;派恩特（中山）生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/31
• 代理公司: 中山市捷凱專(zhuān)利商標(biāo)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44327
• 代理人: 楊連華

1.一種EB病毒NA1-IgA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括酶結(jié)合物、樣品稀釋液、陰性對(duì)照液、質(zhì)控血清液、底物A液、底物B液、終止液、濃縮洗滌液，以及包被板；

所述包被板上包被有EB病毒NA1重組抗原；

所述酶結(jié)合物為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgA；

所述酶結(jié)合物為采用過(guò)碘酸鈉法，利用過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記得到的酶標(biāo)記抗人IgA，所述酶標(biāo)記抗人IgA的使用濃度定為1:20000；

所述EB病毒NA1重組抗原采用以下方法制備：選擇EB病毒NA1蛋白的后237個(gè)氨基酸部分作為靶抗原，以EB病毒NA1相應(yīng)的mRNA序列為模板，通過(guò)RT-PCR獲得目的基因片段，然后轉(zhuǎn)入pGEX-2T基因融合表達(dá)系統(tǒng)，經(jīng)酶切測(cè)序鑒定后，將重組菌落用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)GST親和層析純化，用凝血酶切去GST部分，最終得到所述EB病毒NA1重組抗原；

所述包被板上包被EB病毒NA1重組抗原的制備方法為：

（1）包被：將EB病毒NA1重組抗原用包被緩沖液稀釋后，按95～105μL/孔包被到包被板的孔內(nèi)，在18～28℃下溫育吸附18～24小時(shí)；

（2）封閉：棄去包被液，洗板后用封閉液按145～155μL/孔在2～8℃下溫育封閉18～22小時(shí)；

（3）干燥及保存：棄去封閉液，經(jīng)30～37℃干燥處理4小時(shí)以上后，密封保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述EB病毒NA1重組抗原的分子量為33～35kD、純度≥90%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述封閉液為含5wt%蔗糖、2wt%液體明膠、0.25wt%干酪素鈉、0.1wt%ProClin300的0.07mol/L硼酸-硼砂緩沖液；

步驟（2）中，所述洗板是用10mmol/L的濃縮洗滌液按300μL/孔洗板。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB病毒NA1-IgA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述樣品稀釋液為含蛋白穩(wěn)定劑和防腐劑的溶液；

所述濃縮洗滌液為含有Tween-20的PBS緩沖液；

所述底物A液為含過(guò)氧化脲溶液；

所述底物B液為含TMB的溶液；

所述終止液為1molL硫酸溶液；

所述陰性對(duì)照液為A值小于0.12的EB病毒NA1-IgA抗體陰性人血清；

所述質(zhì)控血清液為己滅活的A值范圍為0.6-2.2的EB病毒NA1-lgA抗體陽(yáng)性人血清。