[發(fā)明專利]一種動物血液連續(xù)分離方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110065819.6
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112522252A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設計）人: 任春陽;謝羽絨
• 申請（專利權）人: 南京澤維爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N9/02
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 蔣真

本發(fā)明公開了一種動物血液連續(xù)分離方法，包括以下步驟：S1.采血：收集動物血液并加入抗凝劑；S2.血液分管：將S1處理后的血液分別加入兩組試管中，得第一血液、第二血液；S3.提取動物血液中的DNA；S4.提取動物血液中的超氧化物歧化酶。本發(fā)明在對血液進行DNA提取和超氧化物歧化酶提取時，通過先對血液進行分管處理，得第一血液和第二血液，然后在分別對第一血液和第二血液單獨進行分離，從而降低了兩者之間的影響，增加了提取的純度。

技術領域

本發(fā)明屬于動物血液分離技術領域，具體涉及一種動物血液連續(xù)分離方法。

背景技術

血液是流動在動物的血管和心臟中的一種紅色不透明的黏稠液體。血液由血漿和血細胞組成，一升血漿中含有900—910克的水，65—85克的蛋白質(zhì)和20克的低分子物質(zhì)，低分子物質(zhì)中有多種電解質(zhì)和有機化合物，血細胞包括紅細胞和白細胞和血小板三類細胞。紅細胞平均壽命為120天，白細胞壽命為9—13天，血小板壽命為8—9天。血液的功能包含血細胞功能和血漿功能兩部分，有運輸、調(diào)節(jié)人體溫度、防御、調(diào)節(jié)人體滲透壓和酸堿平衡四個功能。

目前現(xiàn)有的動物血液連續(xù)分離方法還存在一些問題：在提取DNA和超氧化物歧化酶時，沒有對血液進行單獨處理，兩者之間的操作可能存在相互影響，降低了提取的純度，為此我們提出一種動物血液連續(xù)分離方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種動物血液連續(xù)分離方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：一種動物血液連續(xù)分離方法，包括以下步驟：

S1.采血：收集動物血液并加入抗凝劑；

S2.血液分管：將S1處理后的血液分別加入兩組試管中，得第一血液、第二血液；

S3.提取動物血液中的DNA；

S4.提取動物血液中的超氧化物歧化酶。

優(yōu)選的，所述S1中的抗凝劑的制備方法包括以下步驟：

步驟一、分別量取肝素鈉和蒸餾水，然后將肝素鈉充分溶于蒸餾水中，得抗凝劑母液；

步驟二、用1ml注射器稀釋所述抗凝劑母液，得待烘抗凝劑稀釋液；

步驟三、用所述1ml注射器向5ml注射器內(nèi)定量注入所述待烘抗凝劑稀釋液；

步驟四、將裝有所述待烘抗凝劑稀釋液的所述5ml注射器在35-65℃下烘干，得抗凝劑。

優(yōu)選的，所述步驟二具體為：先用蒸餾水將所述抗凝劑母液稀釋，然后用1ml注射器定量吸取稀釋后的所述抗凝劑母液，再吸取蒸餾水至1ml，得所述待烘抗凝劑稀釋液。

優(yōu)選的，所述步驟三之后、所述步驟四之前還包括：旋轉所述5ml注射器，使所述待烘抗凝劑稀釋液均勻附著于所述5ml注射器的管壁之上。

優(yōu)選的，所述S3種提取動物血液中的DNA的具體步驟包括：

步驟一、取第一血液；

步驟二、血液稀釋：在第一血液樣本中加入KCl溶液，第一血液與KCl溶液的體積比為1：5，顛倒混勻；

步驟三、去除紅細胞：向步驟二中的溶液中加入與第一血液體積相同的甲醇-乙酸混合液，顛倒混勻，離心棄上清，得到殘留細胞團；向細胞團中加入5倍第一血液體積的甲醇-乙酸混合液，吹散混勻，離心棄上清，重復2-3次，直至上清液變無色；

步驟四、裂解白細胞沉淀蛋白：將得到的細胞團轉入2ml微量離心管中，加入適量的雙蒸水混勻，離心棄上清，加入細胞裂解液0.5ml、12μl濃度為222mg/ml的蛋白酶K，60℃孵育4小時；再加入120μl6M的乙酸銨混勻、離心；所述細胞裂解液是0.02M Tris-HCl、1.2mMEDTA、1.5％SDS的混合液；

步驟五、分離純化DNA：用無水乙醇沉淀DNA，并用72％乙醇洗滌沉淀。