[發明專利]一種基于P53突變篩選腫瘤類器官的培養方法

在審

• 申請號: 202110065540.8
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN113186163A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 楊光;周正;牛建軍;劉平果;張以平
• 申請（專利權）人: 南昌五元生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種基于P53突變篩選腫瘤類器官的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.解凍未經處理的腫瘤類器官以產生細胞懸浮液，將細胞懸浮液加入至基礎培養基中混勻離心，除上清液，得腫瘤類器官混合物；

S2.加入基質膠重懸腫瘤類器官混合物，重懸后將腫瘤類器官混合物接種至含有y27632的類器官培養基中進行培養；

S3.當腫瘤類器官混合物第一次換液時，吸取類器官培養基，然后加入含有Nutlin3A的類器官培養基進行再次培養。

2.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S1中的基礎培養基的成分包括體積分數為97％的Advanced DMEM/F12、體積分數為1％的Glutamax、體積分數為1％的HEPES和體積分數為1％的Penicillin-Streptomycin。

3.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，所述Glutamax的摩爾濃度為2mM。

4.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述HEPES在基礎培養基中的摩爾濃度為10mM。

5.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2中的類器官培養基包含以下成分：

Advanced DEME/F12、Glutamax、HEPES、Penicillin-Streptomycin、B27、N2、N-乙酰半胱氨酸、Nicotinamide、[Leu15]-gastrin I human、EGF、FGF10、HGF、Forskolin、A83-01和Rspondin-1human。

6.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2中的類器官培養基中y27632的摩爾濃度為5-10μM。

7.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S3 Nutlin3A在類器官培養基中的摩爾濃度為3.125-50μM。

8.如權利要求7所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S3 Nutlin3A在類器官培養基中的摩爾濃度為50μM。

9.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S3中加入含有Nutlin3A的類器官培養基進行再次培養1-5天。

10.一種如權利要求1-9任一所述的培養方法在篩選具有P53突變的腫瘤類器官上的應用。