[發明專利]一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110064759.6
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112946254A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 吳馮波;林巍靖;劉斌虎
• 申請（專利權）人: 上海云澤生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

1.一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其包含如下步驟：

(1)將生物素標記的抗待測物抗體(Biotin labeled anti-analyte antibodies，BLAAA)與校準品或標本混勻，孵育，得混合液1；

(2)將步驟(1)中所述混合液1與親合素和待測物偶聯的膠乳微球混勻，并檢測初始吸光度A1，孵育后檢測吸光度A2，計算吸光度增值ΔA，ΔA＝A2-A1；

(3)以校準品的吸光度增值ΔA對其所含待測物濃度建立校準曲線，通過比對標本的吸光度增值ΔA實現對所述標本中待測物濃度的定量檢測。

或，

(1)將生物素標記的抗待測物抗體(BLAAA)與校準品或標本混勻，孵育，得混合液1；

(2)將步驟(1)中所述混合液1與待測物偶聯的膠乳微球混勻，孵育，得混合液2；

(3)將步驟(2)中所述混合液2與親合素混勻，并檢測初始吸光度A1，孵育后檢測吸光度A2，計算吸光度增值ΔA，ΔA＝A2-A1；

(4)以校準品的吸光度增值ΔA對其所含待測物濃度建立校準曲線，通過比對標本的吸光度增值ΔA實現對所述標本中待測物濃度的定量檢測。

2.如權利要求1所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其特征在于，所述親合素為含有四個生物素結合位點、能與生物素高親合性結合的一組蛋白，為親合素、親合素聚合物、中和親合素、中和親合素聚合物、鏈霉親合素或鏈霉親合素聚合物。

3.如權利要求1所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其特征在于，所述待測物為小分子待測物，所述小分子待測物為地高辛、他克莫司、環孢素、氯氮平、阿立哌唑、奧氮平、地西泮、喹硫平、利培酮、阿米替林、度洛西汀、去甲替林、文拉法辛、西酞普蘭、丙咪嗪、舍曲林、卡馬西平、奧卡西平、丙戊酸、苯妥英、拉莫三嗪、左乙拉西坦、托吡酯、黃曲霉素、兩性霉素B、伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑、替考拉寧、萬古霉素、利奈唑胺、阿米卡星、多粘菌素B、替加環素、氯霉素、三聚氰胺、伏馬毒素、黃曲霉素M1、黃曲霉素B1、克倫特羅或沙丁胺醇。

4.如權利要求1所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其特征在于，所述BLAAA中，所述生物素與所述抗待測物抗體的摩爾比為5-25:1，優選為10-20:1，更優選為12-17:1。

5.如權利要求1所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其特征在于，所述BLAAA、所述親合素和所述待測物偶聯的膠乳微球以pH緩沖液的形式貯存和使用；

所述BLAAA的濃度為1-1000ng/mL，優選為5-200ng/mL；

所述親合素的濃度為0.5-500μg/mL，優選為2-100μg/mL；

所述待測物偶聯的膠乳微球的濃度為0.01％-1％，優選為0.05％-0.5％。

6.如權利要求1所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法，其特征在于，所述膠乳微球為表面含羧基的聚苯乙烯膠乳微球；所述表面含羧基的聚苯乙烯膠乳微球的平均粒徑優選為50-500nm，更優選為100-400nm；所述表面含羧基的聚苯乙烯膠乳微球的表面羧基密度優選為0.02-0.40mmol/g，更優選為0.06-0.20mmol/g。

7.一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒，其包括：

(1)試劑1(R1)，所述R1為含有BLAAA的pH緩沖液，所述BLAAA為生物素標記的抗待測物抗體；

(2)試劑2(R2)，所述R2為含有親合素和待測物偶聯的膠乳微球的pH緩沖液；

(3)校準品，所述校準品為含有已知濃度的待測物的標準溶液或凍干品；

或，

(1)試劑1(R1)，所述R1為含有BLAAA的pH緩沖液，所述BLAAA為生物素標記的抗待測物抗體；

(2)試劑2(R2)，所述R2為含有待測物偶聯的膠乳微球的pH緩沖液；

(3)試劑3(R3)，所述R3為含有親合素的pH緩沖液；

(4)校準品，所述校準品為含有已知濃度的待測物的標準溶液或凍干品。

8.如權利要求7所述的膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于，所述膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒的各組分如權利要求2-6任一項中所述。