[發明專利]G418發酵液的精制純化工藝

有效

• 申請號: 202110060711.8
• 申請日: 2021-01-18
• 公開（公告）號: CN112724182B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 任兆龍;王福聚;李婷婷
• 申請（專利權）人: 北京泛球生物科技有限公司
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H15/232
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.G418發酵液的精制純化工藝，其特征在于，包括：用草酸調節G418發酵液pH至2.0-3.0，然后加入助濾劑，充分攪拌，再經板框過濾、得到G418溶液；然后將G418溶液依次經陶瓷膜過濾、陽離子交換樹脂吸附、陰離子交換樹脂脫色、大孔吸附樹脂吸附、真空濃縮和活性炭脫色；

所述助濾劑為硅藻土或珍珠巖，目數為40-100目，助濾劑的用量為G418發酵液體積的2-4％；

陶瓷膜過濾中選用多通道陶瓷膜，通道數控制在10-12；

膜材質為玻璃膜，孔徑為0.20μm；

流速控制在5-10m/s，壓力控制在0.1-0.2MPa，濾液溫度控制在40-50℃；

陽離子交換樹脂吸附的方法如下：

A1、陽離子交換樹脂上樣：將陽離子樹脂裝入陽性柱內，G418溶液由上至下進入樹脂柱內，流速控制在2.0-4.0BV/h；

A2、陽離子交換樹脂淋洗：先用純化水自上而下洗滌2.0-4.0個柱體積，流速控制在2.0BV/h，漂洗至洗出液無粉色；然后用0.2mol/L鹽酸自上而下淋洗6-8個柱體積，流速控制在2.0-4.0BV/h，最后用純化水淋洗至洗出液的pH4.0-5.0；

A3、陽離子交換樹脂洗脫：淋洗結束后，用0.5mol/L氨水由上至下進入樹脂柱內，流速控制在2.0-4.0BV/h，收集氨水解析液，至流出的氨水解析液中G418效價低于5.0mg/L時，停止洗脫；

陰離子交換樹脂脫色包括：將氨水解析液進入陰離子交換樹脂，流速控制在1.5-3.0BV/h，進行脫色，收集脫色液；脫色液顏色為清澈透明或淡黃色，若顏色深，呈現棕色或深黃色，則需重復陰離子交換樹脂脫色；

所述陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂，其樹脂材料的母體結構為苯乙烯-二乙烯苯共聚物，其中二乙烯苯在共聚物中的摩爾百分含量為4％-7％，樹脂材料的用量為G418質量的30-50倍；樹脂柱的徑高比為1:8-10；

大孔吸附樹脂吸附的方法如下：

B1、大孔吸附樹脂上樣：將陰離子交換樹脂脫色液以2.0-4.0BV/h的流速由上至下進入到大孔樹脂柱中，直至樹脂柱飽和，停止吸附，靜置4.0-6.0h；

B2、大孔吸附樹脂淋洗：先用純化水自上而下洗滌2.0-4.0個柱體積，流速控制在2.0-4.0BV/h；

B3、大孔吸附樹脂洗脫：淋洗結束后，用10％甲醇水溶液由上至下進入樹脂柱內，流速控制在2.0-4.0BV/h，洗脫5.0-6.0個柱體積，收集含有G418的甲醇液，然后用0.03mol/L硫酸溶液洗脫，洗脫2.0-4.0個柱體積，收集硫酸解析液，至流出的硫酸解析液中G418效價低于5.0mg/L時，停止洗脫；

所述大孔吸附樹脂，其樹脂材料的母體結構為聚苯乙烯，樹脂材料的用量為G418質量的10-20倍；樹脂柱的徑高比為1:8-10。

2.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于，用草酸調節G418發酵液pH至2.0-3.0，攪拌2-3h后加入助濾劑。

3.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于，加入助濾劑攪拌20-40min后再經板框過濾。

4.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于，真空濃縮的條件為：50-70℃，真空度-0.06～-0.09MPa，濃縮至原收集液體積的1/8-1/10。

5.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于，經真空濃縮后，向濃縮液中加入活性炭攪拌0.5-1.0h；靜置0.5-1.0h，整個過程溫度控制在55-60℃；

活性炭的目數為80-200目，用量為G418質量的1/50-1/20。

6.根據權利要求1-5任一項所述的工藝，其特征在于，所述G418發酵液為棘孢小單孢菌(Micromonospora echinospora)、絳紅色小單孢菌(Micromonospora purpurea)或紅橙小單孢菌(Micromonospora rhodorangea)發酵液。