[發明專利]定性檢測單糖α、β構型異構體的方法和檢測單糖異構體比例的方法

有效

• 申請號: 202110059488.5
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112903839B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發明（設計）人: 張峰;馮峰;李偉明;劉芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京鼎真知識產權代理事務所(普通合伙) 11815
• 代理人: 張濯非

本發明公開了定性檢測單糖α、β構型異構體的方法和檢測單糖異構體比例的方法，其中，該定性檢測單糖α、β構異構體的方法包括：將單糖樣品溶于乙腈水的溶液中，以便得到樣品溶液；以及將所述樣品溶液進行色譜?質譜聯用檢測，基于檢測結果，確定所述單糖樣品是否存在異構體。該方法將單糖溶于乙腈水溶液中，易于單糖異構體的檢測。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體地，涉及定性檢測單糖異構體的方法和檢測單糖異構體比例的方法。

背景技術

研究表明，單糖在液體中結構不穩定，會發生變旋現象，同時形成1種開環結構和2種環式構型(α、β構型)的化合物，并且以2種環式結構為主要構型。圖5顯示了D－葡萄糖在水溶液中形成的α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖的構象，這些異構體的存在使得當許多葡萄糖結合在一起的時候會形成多種多糖，例如當D-葡萄糖以α-1,4-糖苷鍵連接時會形成直鏈淀粉，而以β-1,4-糖苷鍵連接時會形成纖維素。此外，在生物體內，不同的異構體生理功能也存在差異，例如，只有α-D-(+)-葡萄糖能促進胰島素分泌量的顯著增加，其他糖類則無此效果。

盡管目前的研究已經清楚單糖在不同的溶劑體系中α和β兩種構象的比例會發生變化，但是對于單糖在特定溶劑體系下兩種異構體比例的準確定性和定量目前還沒有很好的方法，因此，單糖異構體的檢測方法有待研究。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種定性檢測單糖異構體的方法，該方法能對乙腈水溶液中的異構體進行檢測，判斷該單糖的乙腈溶液中是否存在異構體。

需要說明的是，本發明是基于發明人的下列工作而完成的：

發明人發現，本發明中所提到的10種單糖，在一個固定的液相色譜分離條件下，溶解于乙腈/水(v/v)溶液體系中的每種單糖均會形成α和β兩個色譜峰，且2個色譜峰的比例會隨著乙腈/水(v/v)溶液體系中已腈濃度的改變而改變。

因而，根據本發明的一個方面，本發明提供了一種定性檢測單糖異構體的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：將單糖樣品溶于乙腈水的溶液中，以便得到樣品溶液；以及將所述樣品溶液進行液相色譜-質譜聯用檢測，基于檢測結果，確定所述單糖樣品是否存在異構體。

發明人驚奇的發現，將單糖溶于乙腈水溶液中，在進一步優化色譜分離條件后，每種單糖的α、β兩個異構體可以實現基線分離，從而根據出峰情況不僅可判斷乙腈水溶液中的單糖是否存在異構體，而且可以對單糖的α、β兩個異構體的比例實現準確定量。從而解決了單糖α和β異構體難以準確定性定量檢測的難題。

另外，根據本發明上述實施例的定性檢測單糖異構體的方法，還可以具有如下附加的技術特征：

根據本發明的實施例，所述單糖選自D-甘露糖(mannose)，D-(-)-核糖(ribose)，D-甘露醇(mannitol)，L-(+)-阿拉伯糖(arabinose)，D-(+)-半乳糖(galactose)，L-(-)-巖藻糖(fucose)， D-(-)-果糖(fructose)，D-(+)-葡萄糖(glucose)的至少一種。

根據本發明的實施例，所述液相色譜-質譜聯用檢測的流動相的有機相為乙腈，水相為堿性溶液，優選地，為1mmol/L甲酸銨。

根據本發明的實施例，所述液相色譜-質譜聯用檢測的洗脫為等度洗脫。

根據本發明的實施例，所述等度洗脫的洗脫條件為90％乙腈 /1mmol甲酸銨水溶液，v/v。

根據本發明的實施例，所述液相色譜-質譜聯用檢測的色譜條件：色譜柱：ACQUITYUPLC BEH Amide色譜柱，規格為2.1mm×100mm，1.7μm；進樣體積：5μL；流速：0.2-0.5 mL/min。