[發(fā)明專利]一種聚谷氨酸載體佐劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110058577.8
• 申請(qǐng)日: 2021-01-16
• 公開（公告）號(hào): CN112717126A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 申鶴云;任美;白林濤;高干;馮越
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K39/39;A61K9/51;A61K47/34;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

一種聚谷氨酸載體佐劑的制備方法屬于生物醫(yī)用納米材料及其制備領(lǐng)域。α?聚谷氨酸(α?PGA)接枝苯丙氨酸，得到聚合物α?PGA?F。以α?PGA?F為載體，通過疏水相互作用自組裝過程中包裹抗原?卵清蛋白(OVA)，形成粒徑為200?300nm的粒子(OVA@α?PGA?F NPs)。本方法操作簡單、耗時(shí)短、合成條件溫和可控、再現(xiàn)性強(qiáng)。本材料具有良好的生物相容性，細(xì)胞溶酶體微酸環(huán)境可以激發(fā)α螺旋結(jié)構(gòu)產(chǎn)生，柔性高分子變?yōu)槭杷裕幸嬗谌苊阁w逃逸，增強(qiáng)細(xì)胞免疫的誘導(dǎo)。與已報(bào)道的γ?PGA?F納米佐劑相比，α?PGA?F提高了腫瘤壞死因子?α和白介素?6的釋放量，增加了I類主要組織相容性復(fù)合體分子和共刺激分子CD 80的表達(dá)量，達(dá)到增強(qiáng)細(xì)胞免疫誘導(dǎo)的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)用納米材料及其制備領(lǐng)域，具體涉及聚谷氨酸載體佐劑制備方法。

背景技術(shù)

隨著人們對(duì)免疫系統(tǒng)認(rèn)識(shí)的增加，以納米粒子作為疫苗佐劑實(shí)現(xiàn)抗原與佐劑共同遞送的策略逐漸受到人們的關(guān)注。納米載體佐劑可以實(shí)現(xiàn)抗原與佐劑的共同遞送，防止抗原降解。更重要的是納米載體佐劑可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子來促進(jìn)免疫細(xì)胞的募集，從而增加抗原呈遞細(xì)胞(antigen-processing cell,APC)與T細(xì)胞之間相互作用的機(jī)會(huì)，進(jìn)一步誘導(dǎo)體液免疫或細(xì)胞免疫。外源性抗原被細(xì)胞攝取后，在溶酶體被降解成肽，被Ⅱ類主要生物組織相容復(fù)合物Ⅱ(classⅡmajor histocompatibility complex,MHC-Ⅱ)呈遞給CD4⁺T細(xì)胞，引起體液免疫應(yīng)答。納米載體佐劑可以增加外源性抗原誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的可能。納米顆粒從溶酶體逃逸出來之后，釋放出抗原。抗原在細(xì)胞質(zhì)中降解成肽，被Ⅰ類主要生物組織相容復(fù)合物(classⅠmajor histocompatibility complex,MHCⅠ)交叉呈遞至CD8⁺T細(xì)胞，能夠刺激細(xì)胞免疫應(yīng)答。因此，通過溶酶體逃逸實(shí)現(xiàn)抗原的交叉呈遞是誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的關(guān)鍵條件(Biomaterials 2019,7,4873)。Liu et al.制備了具有pH響應(yīng)的聚(D，L-乳酸-乙醇酸共聚物)納米粒子，能夠破壞溶酶體膜快速釋放抗原并誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫應(yīng)答(ACSNano 2015,9,4925)。Liu et al.通過使用Mn²⁺與佐劑分子核苷酸低聚結(jié)合域1激動(dòng)劑形成配位聚合物，包裹卵清蛋白(ovalbumin,OVA)，制備了一種腫瘤疫苗。增加了細(xì)胞對(duì)抗原的攝取，促進(jìn)了樹突狀細(xì)胞的成熟以及抗原的交叉呈遞(ACS Nano 2019,13,13127)。Akashiet al.制備了由兩親性的γ-聚谷氨酸(poly(γ-glutamic acid),γ-PGA)組成的尺寸可調(diào)節(jié)的納米載體佐劑。200nm的大尺寸納米顆粒更容易被巨噬細(xì)胞攝取，并且還將包裹的OVA從溶酶體遞送至細(xì)胞質(zhì)(Biomaterials 2011,32,4959)，有效誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。以上研究表明聚合物納米顆粒可以防止抗原的降解，提高APC的攝取，有效地調(diào)控體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而增強(qiáng)疫苗的免疫誘導(dǎo)效果。

因此我們研究了一種基于接枝聚合物α-PGA-F的納米載體佐劑及其制備方法。這種方法具有以下優(yōu)勢(shì)，一方面簡單易操作，耗材少、需控制的復(fù)雜因素少。另一方面α-PGA制備的載體佐劑的α螺旋二級(jí)結(jié)構(gòu)能夠更有效地破壞溶酶體膜，保護(hù)抗原從溶酶體逃逸出來，促進(jìn)抗原的交叉提呈，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種可以促進(jìn)抗原交叉遞呈，增強(qiáng)細(xì)胞免疫響應(yīng)的聚氨基酸納米載體佐劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種可以促進(jìn)抗原交叉遞呈，增強(qiáng)細(xì)胞免疫響應(yīng)的聚氨基酸納米載體佐劑的制備方法。

該聚氨基酸納米載體佐劑具有如下特征

(1)具有均一的尺寸，粒徑約為200-300nm；

(2)具有良好的生物相容性；

(3)在酸性環(huán)境中具有明顯的α螺旋結(jié)構(gòu)；

(4)有良好的溶酶體逃逸效果；