[發(fā)明專利]一種標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品及其制備方法、應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110057023.6
• 申請(qǐng)日: 2021-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112378835B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李國(guó)平;劉正權(quán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 泛肽生物科技（浙江）有限公司
• 主分類號(hào): G01N15/10
• 分類號(hào): G01N15/10
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 周希良

本發(fā)明屬于細(xì)胞檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品及其制備方法、應(yīng)用。其中，標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品的制備方法，包括以下步驟：（1）將熒光聚苯乙烯微球分散于凍干保護(hù)劑中，得到聚苯乙烯微球混液；（2）取精確定量的聚苯乙烯微球混液置于液氮中，得到球形制劑；（3）將球形制劑置于流式管中，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。利用凍干保護(hù)劑凍干熒光聚苯乙烯微球，凍干后微球可長(zhǎng)期保存，并穩(wěn)定用于流式淋巴亞群標(biāo)準(zhǔn)絕對(duì)計(jì)數(shù)；經(jīng)液氮速凍凝結(jié)成球形制劑，凍干后球形制劑可便攜運(yùn)輸和實(shí)驗(yàn)操作；微球凍干效率和回收率高，凍干后微球能夠直接用于流式淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)

淋巴細(xì)胞的水平是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功能的重要指標(biāo)。當(dāng)不同的淋巴細(xì)胞亞群的量及功能發(fā)生異常改變時(shí)，機(jī)體就會(huì)產(chǎn)生一系列的病理變化及免疫功能失調(diào)，因此檢測(cè)人類淋巴細(xì)胞亞群的變化，對(duì)一些疾病的早期發(fā)現(xiàn)和控制、臨床治療及評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)有著非常重要的意義。

流式細(xì)胞術(shù)，是臨床上檢測(cè)淋巴亞群的標(biāo)準(zhǔn)，能夠同時(shí)檢測(cè)集中淋巴細(xì)胞的表面抗原，能夠得到亞群細(xì)胞的相對(duì)比例，通過(guò)參照物，可以由相對(duì)比例計(jì)算出亞群細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量。

目前，亞群細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)比較常用方法是用計(jì)數(shù)微球。市面上的標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球是溶液或粉末，其在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中存在以下不足之處：

（1）儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件苛刻，需要低溫（2-8℃）；

（2）儲(chǔ)存周期短，保存期限為1年左右；

（3）不能直接用于流式淋巴亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)，需要先驗(yàn)證微球溶液或粉末是否影響抗體試劑反應(yīng)體系，使用過(guò)程繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，有可能影響抗體試劑的反應(yīng)體系；

（4）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)有環(huán)境污染風(fēng)險(xiǎn)。

因此，本領(lǐng)域亟需提供一種便于實(shí)驗(yàn)操作、可便攜運(yùn)輸、性能穩(wěn)定，用于流式淋巴亞群標(biāo)準(zhǔn)絕對(duì)計(jì)數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

基于現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足之處，本發(fā)明的目的之一是至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題之一或多個(gè)，換言之，本發(fā)明的目的之一是提供滿足前述需求之一或多個(gè)的一種標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品及其制備方法、應(yīng)用。

為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯絕對(duì)計(jì)數(shù)微球凍干品的制備方法，包括以下步驟：

（1）將熒光聚苯乙烯微球分散于凍干保護(hù)劑中，得到聚苯乙烯微球混液；

（2）取精確定量的聚苯乙烯微球混液置于液氮中，得到球形制劑；

（3）將球形制劑置于流式管中，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。

利用凍干保護(hù)劑凍干熒光聚苯乙烯微球，凍干后微球可長(zhǎng)期保存，并穩(wěn)定用于流式淋巴亞群標(biāo)準(zhǔn)絕對(duì)計(jì)數(shù)；經(jīng)液氮速凍凝結(jié)成球形制劑，凍干后球形制劑可便攜運(yùn)輸和實(shí)驗(yàn)操作；微球凍干效率和回收率高，凍干后微球能夠直接用于流式淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)。

作為優(yōu)選方案，所述凍干保護(hù)劑包括磷酸鹽緩沖液、海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白和Decon90溶液，凍干保護(hù)劑的pH為7.0～7.4。本發(fā)明的凍干保護(hù)劑的Decon90溶液作為表面活性劑，在凍干微球復(fù)溶后，能有效降低復(fù)溶懸液表面張力，增強(qiáng)微球親水性，有助增強(qiáng)微球懸液分散作用。

作為優(yōu)選方案，所述海藻糖占磷酸鹽緩沖液的質(zhì)量/體積百分比濃度為2～3%。

作為優(yōu)選方案，所述甘露醇占磷酸鹽緩沖液的質(zhì)量/體積百分比濃度為2～10%。

作為優(yōu)選方案，所述牛血清白蛋白占磷酸鹽緩沖液的質(zhì)量/體積百分比濃度為1～5%。