[發明專利]一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法

在審

• 申請號: 202110057019.X
• 申請日: 2021-01-15
• 公開（公告）號: CN112646749A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 常坤;楊永;張成;宋偉;蔡東霞;趙春會
• 申請（專利權）人: 駐馬店華中正大有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/38;C12P29/00;C12R1/49
• 代理公司: 駐馬店博恩知識產權代理事務所(普通合伙) 41195
• 代理人: 李紅衛

本發明屬于金霉素發酵技術領域，具體公開一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法，由金色鏈霉菌作為出發菌株，經過純種培養、三級發酵生成金霉素，具體工藝步驟包括砂土孢子制備工序、母瓶斜面孢子制備工序、子瓶斜面孢子制備工序、一級種子制備工序、二級種子制備工序、發酵制備工序，所述一級種子制備工序中種子培養基滅活以后的PH值由氨水調節，用氨水在培養基消毒后調整pH，通過控制氨水的滴加速度和合適的時機加入，一方面可緩沖pH，另一方面則是可以為孢子生長提供速效氮源，物美價廉。

技術領域

本發明屬于金霉素發酵技術領域，尤其涉及一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法。

背景技術

金霉素的發酵生產方法，是由金色鏈霉菌作為出發菌株，經過純種培養、二級發酵生成金霉素，發酵過程中微生物的正常生長需要維持在一定的pH值下，pH對微生物的生長和代謝產物生成都有很大影響。不同的微生物對pH值的要求是不同的，每種微生物都有自己的生長最適和耐受的pH值，大多數細菌的最適pH值為6.5～7.5；霉菌的最適pH值為4.0～5.8，酵母菌的最適pH值為3.8～6.0；放線菌的最適pH值為6.5～8.0，有的微生物生長繁殖階段的最適pH范圍與產物生成階段的是不一致的，這不僅與菌種特性有關，也與產物的化學性質有關。特別是在金霉素的發酵生產過程中，種子培養基的消后pH不僅影響孢子的萌發，同時也影響種子的生長趨勢，更是影響抗生素的產量。現有種子的培養基的pH調整一般用氫氧化鈉調整，但是氫氧化鈉屬于強堿，對培養基營養物質會有破壞，對pH的緩沖能力弱，同時，鈉離子增加微生物生長環境的滲透壓，對種子的生長造成一定的影響。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法，是由金色鏈霉菌作為出發菌株，經過純種培養、二級發酵生成金霉素，具體工藝步驟包括砂土孢子制備工序、母瓶斜面孢子制備工序、子瓶斜面孢子制備工序、一級種子制備工序、發酵制備工序，所述一級種子制備工序中種子培養基的pH值由濃度22.5%的氨水調節至6.15±0.05，氨水的添加量為種子培養基體積的0.1%，由于氨水對微生物的pH微環境緩沖和調節，可以促進微生物生長環境的滲透壓平衡，同時促進孢子對氮源的快速吸收，一級種子液定容4000 升，添加4L氨水，濃度為22.5%，利于種子生長從而提高后期種子在發酵工工序的產率，在種子制備工序，種子罐中每升培養基水溶液中含有花生餅粉 20g、黃豆餅粉 10g、玉米淀粉 35g、氯化鈉1.5g、硫酸銨 2.5g、碳酸鈣 4g、酵母粉15g、磷酸二氫鉀 0.5g。

進一步的，發酵生產采取變溫控制，接種后培養溫度在 28-34℃，菌絲長好后降溫至 29±3℃培養，培養壓力在 0.01Mpa—0.04Mpa，發酵培養粘度為 1-35 秒，發酵周期為90-124小時。

進一步的，在發酵制備工序，每個種子罐中培養基水溶液為 4000 升。

本發明具有的優點是：用濃度22.5%的氨水調整種子培養基的pH，一方面可緩沖pH， pH調整到6.15±0.05，為金霉素種子生長的最佳pH范圍，促進微生物生長環境的滲透壓平衡,另一方面則是可以為孢子生長提供速效氮源，在比較好的微環境中，快速利用氮源，促進種子很快的進入對數期，提前轉入二級發酵罐，節約時間，物美價廉。

具體實施方式

實施例

一種利用氨水調節培養基pH的金霉素種子生產方法，是由金色鏈霉菌作為出發菌株，經過純種培養、二級發酵生成金霉素，具體工藝步驟包括砂土孢子制備工序、母瓶斜面孢子制備工序、子瓶斜面孢子制備工序、一級種子制備工序、發酵制備工序，所述一級種子制備工序中種子培養基滅pH值由氨水調節，具體的，包括以下步驟：