[發(fā)明專利]一種總蛋白剛果紅染色作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)的免疫印跡定量檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110056963.3 | 申請日： | 2021-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN112881707B | 公開（公告）日： | 2022-06-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 許朝進(jìn);陳偉光;王俊靈;張佳佳 | 申請（專利權(quán)）人： | 溫州醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 溫州名創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33258 | 代理人： | 朱海曉 |
| 地址： | 325000 浙江省溫州市甌海*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蛋白 剛果 染色 作為 內(nèi)參 標(biāo)準(zhǔn) 免疫 印跡 定量 檢測 方法 | ||
1.一種總蛋白剛果紅染色作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)的免疫印跡定量檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）制備變性待測蛋白質(zhì)樣本；
（2）通過凝膠電泳對待測蛋白質(zhì)樣本分離；
（3）將步驟（2）電泳分離的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至固相膜上；
（4）用剛果紅對步驟（3）轉(zhuǎn)印后的固相膜進(jìn)行染色、脫色；
（5）將步驟（4）染色后的固相膜進(jìn)行免疫檢測；
步驟（2）中，待測蛋白質(zhì)樣本的上樣量為2.5~20μg；
步驟（4）中，剛果紅染色液配方為DW(ddH2O)緩沖液、剛果紅、甲醇、NaCl組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總蛋白剛果紅染色作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)的免疫印跡定量檢測方法，其特征在于：所述的固相膜為硝酸纖維素膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總蛋白剛果紅染色作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)的免疫印跡定量檢測方法，其特征在于：步驟（4）中，剛果紅染色液配方為100 mL DW(ddH2O)緩沖液中加入1.0 g剛果紅，80 ml甲醇，0.3 g NaCl；剛果紅工作液包含1m剛果紅染色液和9ml 0.1~0.2M乙酸；固相膜置于剛果紅工作液中染色2~4 min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總蛋白剛果紅染色作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)的免疫印跡定量檢測方法，其特征在于：步驟（5）中，免疫檢測包括以下步驟：
（5-1）將步驟（4）染色后的固相膜置于封閉液中處理封閉；
（5-2）將步驟（5-1）封閉后的固相膜與一抗孵育，然后洗去未特異結(jié)合的一抗；
（5-3）完成步驟（5-2）后，將固相膜與二抗孵育，然后洗去未特異結(jié)合的二抗；
（5-4）完成步驟（5-3）后，使用化學(xué)發(fā)光試劑處理，然后曝光、洗片，采集泳道和發(fā)光條帶的圖像信息。
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