[發(fā)明專(zhuān)利]大腸桿菌偏嗜性可溶性豬PD-1重組蛋白的制備及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110052249.7
• 申請(qǐng)日: 2021-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112661837A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王選年;朱艷平;劉佳;何勇;岳鋒;孫國(guó)鵬;郭東光;李鵬;李文明;劉金宵
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/705
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/705;C12N15/12;C12N15/70;A61K39/12;A61K39/39;A61P31/20
• 代理公司: 鄭州市華翔專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛(ài)軍

1.一種可溶性豬PD-1重組蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.編碼如權(quán)利要求1所述的可溶性豬PD-1重組蛋白的DNA分子，所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種如權(quán)利要求1所述的可溶性豬PD-1重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將權(quán)利要求2所述的DNA分子克隆入表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)中，獲得重組表達(dá)載體pET-32a-PD1；

(2)將步驟(1)獲得的重組表達(dá)載體pET-32a-PD1轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta工程菌株中，挑取單菌落于37℃培養(yǎng)作為種子液；

(3)將步驟(2)獲得的種子液按體積比1:100接種于含Amp的YT培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)至OD₆₀₀值為0.5～1.0，加入IPTG，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；

(4)將誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)層析純化并濃縮，獲得大腸桿菌偏嗜性的可溶性豬PD-1重組蛋白。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)的條件為：誘導(dǎo)溫度為28℃、誘導(dǎo)時(shí)間為4h，IPTG濃度為0.5mmol/L。

5.如權(quán)利要求1所述的可溶性豬PD-1重組蛋白在制備PCV2疫苗免疫藥物中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求1所述的可溶性豬PD-1重組蛋白在制備PCV2疫苗增強(qiáng)劑或佐劑中的應(yīng)用。

7.含有權(quán)利要求2所述的可溶性豬PD-1重組蛋白的DNA分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

8.含有權(quán)利要求2所述的可溶性豬PD-1重組蛋白的DNA分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌在制備相應(yīng)產(chǎn)品中的應(yīng)用。