[發明專利]一種快速檢測新型冠狀病毒D614G突變的引物組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 202110050940.1
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN113151585A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 曹國君;許笑;邢志芳;關明;唐雪梅;馬艷春
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院北院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

本發明提供了一種快速檢測新型冠狀病毒D614G突變的引物組合物及試劑盒，該引物組合物包括引物組和PNA探針；該PNA探針的序列如SEQ ID NO：7所示；引物組包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物和LB引物，選自包括序列如SEQ ID NO：2～6的組合物、包括序列如SEQ ID NO：14～18的組合物、包括序列如SEQ ID NO：19～23的組合物和包括序列如SEQ ID NO：24～28的組合物的一組或者幾組；或，引物組包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、LB引物和LF引物，為序列如SEQ ID NO：8～13的組合物。本發明基于LAMP技術開發了一種快速檢測新型冠狀病毒D614G突變的引物組合物及試劑盒，無需復雜、昂貴的輔助設備，在30?60min內即可實現核酸分子標志物的快速檢測，檢測結果可以通過目視法直接判斷，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種快速檢測新型冠狀病毒D614G 突變的引物組合物及試劑盒。

背景技術

冠狀病毒(Coronavirus，CoV)，因其包膜表面有一圈形似日冕的棘突而得 名，廣泛存在于自然界中，是一種呼吸道病毒，其宿主包括人類、脊椎動物和無 脊椎動物。冠狀病毒屬套氏病毒目，冠狀病毒科，冠狀病毒屬，為有包膜的正股 單鏈RNA病毒，直徑為80～120nm，約有3萬個堿基組成，其遺傳物質是已知 RNA病毒中最大的。國際病毒分類命名委員會在2012年根據其遺傳學差異和血 清學特性將冠狀病毒分為α、β、γ、δ四群，其中β群CoV又進一步分為A、B、 C、D四個組。α、β兩群易感染哺乳動物，包含了7種對人類致病的冠狀病毒， 分別為HCoV-OC43、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、 MERS-CoV和SARS-CoV-2；而γ、δ兩群則主要感染禽類。冠狀病毒是一種常 見的、易引發呼吸道疾病的病原體，在引起成人社區獲得性肺炎的病毒中，冠狀 病毒檢出率與其他呼吸道病毒的檢出率相似。SARS-CoV-2感染不僅會對人類的 生命安全構成威脅，還會對全球社會經濟造成極大損失，我們需要“未雨綢繆”， 積極應對，對其流行病學和致病機制進行深入研究，積極研發新型特效藥和疫苗， 并開發出更有效的檢測手段，把冠狀病毒扼殺于“搖籃”階段，為人類的健康保 駕護航。

由于病毒自身的結構特征及宿主眾多，導致該病毒極易發生變異，產生新類 型的冠狀病毒突變體。變異新冠病毒不會增加疾病嚴重性，但其會導致更高的發 病率，產生更多住院及死亡病例，所以需要采取更嚴格的公共衛生措施來控制這 些變異病毒的傳播，確保新冠肺炎“可防、可控、可治”。

D614G是出現的新冠病毒刺突蛋白(spike protein，S蛋白)里的一種氨基 酸的變異，即占據614號位置的是一個天冬氨酸(D)。而變異之后，這個位置 變成了甘氨酸(G)，S蛋白是病毒入侵細胞的“攻城錘”，也是許多疫苗和療 法所針對的目標。因此，刺突蛋白上的突變可能會改變刺突蛋白的性質，讓病毒 更容易入侵細胞，或者讓疫苗和藥物對其失去效果。目前D614G全球最主流的 SARS-CoV-2突變株之一，快速檢測SARS-CoV-2突變情況，及時了解病毒株的 主流突變情況，對于疫情的防控、疾病的診療和疫苗的研發等均具有重要的意義。

目前逆轉錄實時PCR技術被認為是SARS-CoV-2檢測“金標準”，然而該 技術操作復雜，擴增速度較慢(2-3個小時)，需要在要求較高的實驗室內才能 進行，所需的檢測設備價格昂貴，而且需要訓練有素的專業技術人員才能進行檢 測，導致該技術難以推廣，尤其是基礎設施薄弱、偏遠落后的地區難以推廣。而 環介導等溫擴增技術(LAMP)是利用設計的四對特殊引物和具有連置換活性的 Bst DNA聚合酶(具有鏈置換特性)，在60-65℃恒溫條件下進行特異、高效、 快速的擴增靶核酸。但目前未有采用LAMP技術檢測新型冠狀病毒D614G突變 的報道。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種快速檢測新型冠狀病毒D614G突 變的引物組合物及試劑盒。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：