[發明專利]一種豬血木組織培養方法

有效

• 申請號: 202110050053.4
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112690215B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 曾宋君;熊玉萍;文香英;張雪蓮;陳雙艷;楊科明;吳坤林;房林;李琳;馬國華
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 朱雙;劉明星

本發明公開了一種豬血木組織培養方法。本發明以豬血木種子的下胚軸為外植體，成功地進行優良株系的豬血木優質種苗的組織培養和快速繁殖，生產出的豬血木種苗具有遺傳穩定性高，出苗快，苗壯，種苗品質好、抗性強、生長良好等特點；具有很好的市場前景。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種豬血木組織培養方法。

背景技術

豬血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)，山茶科豬血木屬唯一物種，屬于多年生木本植物，目前僅產于廣東省陽春縣八甲鎮。豬血木是一種名貴的木材，也是一種優美的觀賞的園林觀賞苗木，由于人為干擾和生存環境遭到破壞已瀕臨滅絕，目前，僅廣東省陽春縣八甲鎮有分布，數量不超過100株，于1992年就被列為國家二級保護瀕危植物，1998年被國際植物保護協會(IUCN)列為極瀕危物種(Critically Endangered)，2012年被列為國家極小種群野生植物，并被列入《野生動植物瀕危物種國際貿易公約》(CITES)附錄II的保護范疇而被禁止貿易。對豬血木進行種質資源保護和園林應用均需要大量的種苗。豬血木可以通過播種繁殖，但其自然結實率低、且胚常發育不全造成萌發率低。豬血木的圈枝繁殖數量也非常有限，因此通過常規的繁殖難以獲得大量種苗。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬血木組織培養方法。本發明以豬血木種子下胚軸為外植體，操作程序和培養基獨特，具有繁殖效率高、種苗品質好等特點；只需有簡單的植物組織培養設備即可進行。

本發明的豬血木組織培養方法，包括以下步驟：

a.取豬血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)發育良好的種子，經消毒處理后，接種到種子萌發培養基上培養；所述的種子萌發培養基，每升由以下成分組成：20-30g蔗糖、6g瓊脂，余量為1/2MS培養基，pH 5.8-6.0；

b.待種子發芽長至苗高1-2厘米時，切取下胚軸接種到不定芽誘導培養基上進行不定芽的誘導；所述的不定芽誘導培養基，每升由以下成分組成：1-5mg激動素(KT)、20-30mL椰子汁、20-30g蔗糖、6g瓊脂，余量為改良的MS培養基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培養基是將MS培養基中的硝酸鉀替換為990mg/L的硫酸鉀；

c.將誘導出的不定芽切割成單芽或雙芽后繼代培養于增殖培養基進行不定芽的增殖培養；所述的增殖培養基，每升由以下成分組成：1-2mg 6-芐基嘌呤(6-BA)、5-15mL椰子汁、20-30g蔗糖、6g瓊脂，余量為改良的MS培養基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培養基是將MS培養基中的硝酸鉀替換為990mg/L的硫酸鉀；

d.將增殖培養獲得的2-3厘米高的叢生芽切成單芽后，接種到壯苗培養基進行壯苗培養；所述的壯苗培養基，每升由以下成分組成：20-30g蔗糖、6g瓊脂，余量為改良的MS培養基，pH 5.8-6.0；所述的改良的MS培養基是將MS培養基中的硝酸鉀替換為990mg/L的硫酸鉀；

e.將壯苗培養獲得的高3-4厘米的試管苗，在自然光照溫室條件下煉苗7-10天；然后取出試管苗，放入3-5mg/L吲哚丁酸(IBA)溶液中浸泡10-30分鐘，然后移栽到生根基質中進行生根培養；

f.生根培養苗長至6-8厘米高時，進行定植栽培。

優選，所述的消毒處理具體為：將種子先在體積分數75％乙醇水溶液中浸泡10-30秒，再用質量分數0.1％升汞溶液消毒5-10分鐘，無菌水沖洗4-5次。

優選，所述的步驟a-c中培養條件為：溫度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小時/天。

優選，所述的步驟d中培養條件為：溫度24-28℃，光照度2000-2500lx，光照12-16小時/天。

優選，所述的步驟e的生根基質是將珍珠巖和蛭石以體積比1-3：1混合得到的。