[發(fā)明專利]一種用于傳代干細胞的無動物源傳代方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110048348.8 | 申請日： | 2021-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN112680412A | 公開（公告）日： | 2021-04-20 |
| 發(fā)明（設計）人： | 康悅;趙峰 | 申請（專利權(quán)）人： | 遼寧省腫瘤醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107 | 代理人： | 馬維駿 |
| 地址： | 110042 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 傳代 干細胞 動物 方法 | ||
1.一種用于消化干細胞的無動物源成分的消化液，其特征在于，以濃度單位mg/L計，是由以下濃度的組分組成：EDTA-2Na 100～150、重組人胰蛋白酶50～100、磷酸氫二鉀50～70、氯化鉀350～450、碳酸氫鈉300～400、氯化鈉7000～9000。
2.一種用于終止干細胞消化的消化終止液，其特征在于，以濃度單位mg/L計，是由以下濃度的組分組成：氯化鈉7000～9000、十二水合磷酸氫二鈉100～150、氯化鉀350～450、磷酸二氫鉀50～70、硫酸鎂80～100、氯化鈣100～150、D-葡萄糖900～1100、碳酸氫鈉300～400、人血白蛋白350～450。
3.一種用于傳代干細胞的無動物源傳代方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
步驟1、取出應用無動物源成分培養(yǎng)基培養(yǎng)中的干細胞，棄去培養(yǎng)基，應用PBS清洗細胞2次，吸出培養(yǎng)瓶中的液體；
步驟2、按25cm2/mL將權(quán)利要求1所述的無動物源成分消化液加入培養(yǎng)瓶中，使細胞完全浸入消化液中，棄去多余消化液；
步驟3、置于37℃，飽和濕度、體積分數(shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中1～2分鐘；
步驟4、取出培養(yǎng)瓶，加入權(quán)利要求2所述的消化終止液并混勻，用吸管輕柔收集細胞懸液；
步驟5、1000rpm離心5分鐘，棄上清；
步驟6、加入無動物源成分培養(yǎng)基，混勻細胞懸液，接種于培養(yǎng)瓶中。
4.如權(quán)利要求3所述的用于傳代干細胞的無動物源傳代方法，其特征在于，所述的所述的消化終止液與無動物源成分消化液的體積比為1：1。
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