[發明專利]一種負載去甲斑蝥素外泌體的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202110047065.1
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112773775B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 王嬰;王巖;梁樂誼;趙玲;郭密密
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: A61K9/50
• 分類號: A61K9/50;A61K31/365;A61K47/46;A61K35/00
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 王洋

本發明屬于藥學腫瘤藥物新劑型領域，尤其涉及一種負載去甲斑蝥素外泌體的制備方法及其應用，方法具體步驟包括(1)采用超速離心法提取骨髓間充質干細胞外泌體；(2)通過電穿孔法將去甲斑蝥素包裹在所述外泌體內，得載藥外泌體。本發明制得的載藥外泌體能夠提高藥物的肝靶向性以及增強去甲斑蝥素的藥效。

技術領域

本發明屬于藥學腫瘤藥物新劑型領域，尤其涉及一種負載去甲斑蝥素外泌體及其制備方法。

背景技術

隨著納米技術的迅速發展，研究者們一直致力于開發能夠顯著提高藥物靶向性的新型載體，如脂質體、納米粒、納米球等，這些載體利用其較小的粒徑(1μm)，可被網狀內皮系統較豐富的器官所攝取，如肝、脾、骨髓等，從而形成被動靶向。或者對其進行結構修飾或改造，使其對某些組織器官具有特殊的親和力，以達到主動靶向效果。然而，人們在經過大量的動物和臨床試驗后發現，納米載體也存在諸多缺點：納米載體作為外源性物質在穿透細胞膜前即有可能被非靶器官的免疫系統所攝取，從而降低其靶向效率；多數納米載體并不是完全意義上的生物降解材料，具有一定的細胞毒性和免疫原性，且其殘留物的潛在毒性仍有待考證^[1]。在藥劑學領域中，細胞毒性低、靶向效率高的藥物載體一直都是靶向遞藥系統研究亟待突破的瓶頸之一。鑒于外源性載體的局限性，從生物體內探尋天然的載體或許可以解決這些問題。

細胞外泌體(exosome)是一種由真核細胞胞內多泡體與胞膜融合后分泌到細胞外環境中，具有磷脂雙分子層的膜結構腔體，電鏡下呈碟狀小體形態。不同來源的外泌體均含有其來源細胞的胞膜和胞質蛋白成分，較易與鄰近細胞的胞膜發生不同方式的融合，進而將一個細胞的胞膜及胞質蛋白傳遞給另一個細胞，實現不同細胞間的信息傳遞。有研究表明MSC-Exo可作為核酸或藥物的傳遞載體。其優勢：一、由于外泌體特殊的膜結構使其具有生物相容性，可通過膜融合或內吞作用將藥物傳遞到靶細胞；二、與典型的納米系統(如脂質體、納米粒)不同，外泌體可以保護內容物避免巨噬細胞的吞噬和降解，并促進內容物在細胞內的攝取；三、由于外泌體是天然的細胞產物，可長時間在體內循環，提高藥物的生物利用度。此外，由于骨髓間充質干細胞對受損組織的歸巢性，故其外泌體更容易遷移到損傷組織中，且研究表明骨髓間充質干細胞(BMSCs)來源的外泌體含有BMSCs表達的粘附分子，包括CD29、CD44和CD73等，其中CD29即為肝細胞特異性蛋白。因此，BMSCs外泌體對受損的肝臟具一定的“歸巢”效應，但是還是存在一定的爭議。此外，另有研究表明，外泌體自身可通過調節免疫反應對人肝癌細胞的增殖產生顯著抑制作用，這一發現已成為近年來非細胞性腫瘤疫苗研究的熱點。值得關注的是，細胞外泌體粒徑僅為30～150nm，這使其具備了內源性納米載體的基本特性。此外，它還具有可避免非宿主巨噬細胞吞噬、無免疫原性和低細胞毒性等特點。因此，外泌體被開發為一種新型的藥物載體有待科學研究。

由于目前西藥并無針對肝癌的特效制劑，研究者們不斷探尋從中藥及天然植物中尋找治療肝癌的有效藥物。去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)是由蕪青科昆蟲斑蝥的主要成分斑蝥素合成的一種較低毒性的衍生物(見圖1)，對原發性肝癌、食管癌和胃癌等多種惡性腫瘤均有顯著療效。目前用于臨床的有片劑和注射液兩種劑型，但由于其在人體內代謝快，需要頻繁增加給藥次數以維持藥物濃度才能達到治療效果，而大劑量的長期應用對造血系統、泌尿系統等易產生嚴重的不良反應。為了使去甲斑蝥素更好地發揮臨床療效，本課題嘗試運用新型載體包裹去甲斑蝥素，使其在體內緩慢釋放，可避免血藥濃度峰值的出現，并利用新劑型靶向性的特性，充分發揮去甲斑蝥素的抗腫瘤活性并降低其毒副作用。

中國發明專利CN106974938B公開了一種具有抗肝癌作用的骨髓間充質干細胞來源的外泌體及其藥物制劑，由骨髓間充質干細胞來源的外泌體經化合物負載制備而成，所述化合物為具有如下通式結構的此啶并咪唑類有機化合物：所述負載指將所述化合物導入外泌體內，但是并未闡述其釋藥性能，其藥效有待進一步提高。

中國發明專利CN105412153B公開了間充質干細胞來源的外泌體在制備防治丙型肝炎病毒(HCV)藥物中的應用。其制備方法包括外泌體的提取、濃縮和純化。