[發明專利]一種蛋白納米載體、負載有靶向物質的載體及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110046195.3
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112826943B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 郭英姝;曹秀萍;尚鑫鑫
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/42;A61K31/715;A61K38/16;A61K47/54;A61K47/64;A61P31/16;A61P35/00;B82Y5/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

本發明提供了一種蛋白納米載體、負載有靶向物質的載體及制備方法和應用，屬于納米材料技術領域；所述蛋白納米載體以核酸適配體修飾的缺鐵蛋白為殼體，包埋有流感病毒血凝素。本發明蛋白納米載體具有良好生物相容性、較低免疫原性和較高轉移效率，能選擇性地刺激缺鐵蛋白?tfr1表達細胞。缺鐵蛋白的pH敏感性允許流感病毒血凝素的釋放。在流感病毒血凝素的幫助下，蛋白納米載體負載的靶向物質能夠逃離溶酶體，擺脫降解的命運，釋放大量靶向物質進入細胞質，保證靶向物質的完整性和有效性。并且，缺鐵蛋白納米殼體沒有明顯毒副作用，為更安全有效地靶向遞送提供了新方法。

技術領域

本發明涉及納米材料技術領域，尤其涉及一種蛋白納米載體、負載有靶向物質的載體及制備方法和應用。

背景技術

癌癥一直是危害人類生命和健康的重要原因之一。臨床上常用的癌癥治療方法為化療。化療雖然有一定的治療效果，但它缺乏靶向性，對正常組織細胞的損傷給患者帶來極大的痛苦。目前納米材料為靶向遞送藥物提供了新思路。納米材料攜帶小分子藥物進入癌細胞，獨特的尺寸優勢減少了藥物在體內循環過程中的損失，在一定程度上提高了藥物的治療效率。此外，納米載體的存在也提高了小分子藥物的水溶性和穩定性。

現有技術公開的納米載體主要是金屬納米粒子，如納米金顆粒。但是金屬納米粒子存在新陳代謝慢、容易在體內堆積的問題，脂質體體積大且不均勻，在生物安全方面仍然存在許多隱患。

發明內容

本發明的目的在于提供一種蛋白納米載體、負載有靶向物質的載體及制備方法和應用，本發明的蛋白納米載體生物安全性好、代謝快、遞送效率高。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種蛋白納米載體，以核酸適配體修飾的缺鐵蛋白為殼體，包埋有流感病毒血凝素。

優選的，所述核酸適配體包括核酸AS1411適配體。

本發明還提供了上述方案所述蛋白納米載體在制備靶向遞送載體中的應用。

本發明還提供了一種負載有靶向物質的載體，包括上述方案所述蛋白納米載體和結合體，所述結合體包埋在所述蛋白納米載體的殼體內，所述結合體為雙鏈siRNA和核定位信號肽的結合體。

優選的，所述雙鏈siRNA是由第一RNA和第二RNA堿基互補配對得到；所述第一RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述第二RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

優選的，所述雙鏈siRNA的制備方法包括以下步驟：將第一RNA溶液和第二RNA溶液混合，進行堿基互補配對反應，得到雙鏈siRNA；所述堿基互補配對反應的時間為5～6h；所述堿基互補配對反應的溫度為20～30℃。

本發明還提供了上述方案所述載體的制備方法，包括以下步驟：

1)將雙鏈siRNA、核定位信號肽、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液和N-羥基琥珀酰亞胺溶液混合，進行結合反應，得到結合反應產物，所述結合反應產物中包含siRNA和核定位信號肽的結合體，命名為siRNA/NLS；

2)將缺鐵蛋白于pH值為2～2.5的條件下進行解離，得到解離缺鐵蛋白；將所述結合反應產物、流感病毒血凝素溶液和解離缺鐵蛋白進行混合，得到混合液，調節所述混合液的pH值至7.4～7.6，進行組裝，得到核殼結構，命名為Apn/siRNA/NLS/HA；

3)將所述Apn/siRNA/NLS/HA、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液和NHS溶液混合，得到混合液，對所述混合液進行第一透析，得到第一透析液；所述第一透析采用的透析膜的截留分子量為12～14KD；

4)將所述第一透析液和核酸AS1411適配體溶液混合，進行修飾，得到修飾產物，所述修飾產物中包含所述載體。