[發(fā)明專利]一種蛋白納米載體、負載有靶向物質(zhì)的載體及制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110046195.3 | 申請日： | 2021-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN112826943B | 公開（公告）日： | 2022-06-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭英姝;曹秀萍;尚鑫鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 齊魯工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A61K47/69 | 分類號： | A61K47/69;A61K47/42;A61K31/715;A61K38/16;A61K47/54;A61K47/64;A61P31/16;A61P35/00;B82Y5/00 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務(wù)所 11569 | 代理人： | 張夢澤 |
| 地址： | 250353 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蛋白 納米 載體 載有 靶向 物質(zhì) 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種負載有靶向物質(zhì)的載體，由蛋白納米載體和結(jié)合體組成；
所述蛋白納米載體以核酸適配體修飾的缺鐵蛋白Apn為殼體，包埋有流感病毒血凝素HA和結(jié)合體；
所述結(jié)合體為雙鏈siRNA和核定位信號肽NLS的結(jié)合體；
所述核酸適配體為核酸AS1411適配體；
所述雙鏈siRNA是由第一RNA和第二RNA堿基互補配對得到；所述第一RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述第二RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
所述核定位信號肽NLS的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體，其特征在于，所述雙鏈siRNA的制備方法包括以下步驟：將第一RNA溶液和第二RNA溶液混合，進行堿基互補配對反應(yīng)，得到雙鏈siRNA；所述堿基互補配對反應(yīng)的時間為5~6h；所述堿基互補配對反應(yīng)的溫度為20~30℃。
3.權(quán)利要求1或2所述載體的制備方法，包括以下步驟：
1）將雙鏈siRNA、核定位信號肽NLS、1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽溶液和N-羥基琥珀酰亞胺溶液混合，進行結(jié)合反應(yīng)，得到結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物，所述結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物中包含siRNA和核定位信號肽的結(jié)合體，命名為siRNA/NLS；
2）將缺鐵蛋白Apn于pH值為2~2.5的條件下進行解離，得到解離缺鐵蛋白；將所述結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物、流感病毒血凝素HA溶液和解離缺鐵蛋白進行混合，得到混合液，調(diào)節(jié)所述混合液的pH值至7.4~7.6，進行組裝，得到核殼結(jié)構(gòu)，命名為Apn/siRNA/NLS/HA；
3）將所述Apn/siRNA/NLS/HA、1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽溶液和NHS溶液混合，得到混合液，對所述混合液進行第一透析，得到第一透析液；所述第一透析采用的透析膜的截留分子量為12~14KD；
4）將所述第一透析液和核酸AS1411適配體溶液混合，進行修飾，得到修飾產(chǎn)物，所述修飾產(chǎn)物中包含所述載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1）中結(jié)合反應(yīng)的時間為5~6h；所述結(jié)合反應(yīng)的溫度為20~30℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述組裝后，還包括采用RNase A和蛋白酶K依次對組裝后的混合物進行酶解。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3）中所述混合的時間為1.5~2.5h。
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