[發明專利]一種可溶性融合蛋白DT390-Cap及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110045755.3
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112898435B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 范闊海
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/81;C12N15/62;A61K39/12;A61K39/385;A61P31/20;C12R1/84
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源;楊文艷

1.一種可溶性融合蛋白DT390-Cap，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.權利要求1所述的一種可溶性融合蛋白DT390-Cap在制備豬圓環病毒2型疫苗中的應用。

3.權利要求1所述的一種可溶性融合蛋白DT390-Cap的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

pwPICZalpha-DT390-Cap表達載體的構建：以pwPICZalpha-Cap作為模板，使用帶有XhoI和NcoI位點的上游引物和帶有EcoRI位點的下游引物進行PCR擴增；擴增產物進行XhoI和EcoRI雙酶切后克隆到pwPICZalpha用于測序；經測序正確的擴增產物經NcoI和EcoRI雙酶切后，克隆到含有DT390的pwPICZalpha-DT390中，構建得到pwPICZalpha-DT390-Cap；

融合蛋白DT390-Cap的表達：將上述步驟得到的線性化的pwPICZalpha-DT390-Cap電轉化到巴斯德畢赤酵母菌株中，在含有100μg/ mL Zeocin的YPD瓊脂平板篩選陽性克隆菌株；篩選到的陽性菌株經甲醇誘導表達后，離心收集上清液；

融合蛋白DT390-Cap的純化與檢測：通過Ni-Sepharose樹脂和強陰離子交換樹脂Poros50HQ對上清液進行純化，得到純化后的融合蛋白DT390-Cap；通過SDS-PAGE和Western blot對純化產物進行分析檢測。

4. 根據權利要求3所述的一種可溶性融合蛋白DT390-Cap的制備方法，其特征在于，帶有XhoI和NcoI位點的上游引物pCap-Nco為：5’ CCG CTC GAG CCA TGG GGT GGT GGT GGTTCT ACT TAC CCA AGA AGA AGA TAC AGA 3’， 帶有EcoRI位點的下游引物pCap-Eco為：5’CCG GAA TTC TTA GTG GTG GTG GTG GTG GTG TGG GTT CAA AGG TGG GTC CTT 3’。