[發明專利]一種基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統

在審

• 申請號: 202110045123.7
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112626070A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 萬逸;戴睿
• 申請（專利權）人: 海南微氪生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N9/22;C12N15/63
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

1.一種基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統，其特征在于，包括質粒載體；

所述質粒載體包括：編輯器和指導RNA，所述編輯器與所述指導RNA為非共價結合；

所述編輯器包括用于定向的核酸酶失活的Cas9結構域和XIS切離酶復合體；

所述指導RNA包含編碼靶向區域的crRNA和特異性靶向基因；

所述核酸酶失活的Cas9結構域用于與所述指導RNA定向結合定位特異性位點，所述XIS切離酶復合體用于定向切除特異性靶向基因片段。

2.根據權利要求1所述的基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統，其特征在于，所述XIS切離酶復合體包括：Mycobacterium phage D29切離酶、Mycobacterium phage L5切離酶、Staphylococcus phage L54a切離酶、Streptomyces ambofaciens切離酶、Bacillussubtilis切離酶、Enterobacteria phage phi80切離酶、Salmonella phage HK620切離酶、Shigella phage Sf6切離酶、Streptococcus pneumoniae切離酶、Streptococcusagalactiae serotype V切離酶、Escherichia phage HK022切離酶、Escherichia phagelambda切離酶、Enterobacteria phage 434切離酶、Enterobacteria phage P21切離酶、Saccharopolyspora erythraea切離酶、Salmonella phage P22切離酶、Acyrthosiphonpisum secondary endosymbiont phage 1切離酶、Shigella phage SfV切離酶和絲狀噬菌體切離酶XIS5。

3.根據權利要求1所述的基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統，其特征在于，所述核酸酶失活的Cas9結構域包括D10A、D10N、H840A、H840N、H840Y、G1104、L1111、S1136、G1218、N1317、T1337、D1135、S1109、G1104、S1136、R1335、T1337G、1104K、S1109T、L1111、S1136N、G1218R、N1317K、R1335E、T1337R、D1135V、D1135E、R1335Q中的一個或兩個以上組合。

4.根據權利要求1所述的基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統，其特征在于，所述質粒載體包括：Pllp-OmpA、pllp-STII、pMBP-P、pMBP-C、pET-GST、pET-Trx、pET-His、pET-CKS、pET-DsbA、pTZ19R DNA、pUC57 DNA、PMD18T、PQE30、pUC18、pUC19、pTrcHisA、pTrxFus、pRSET-A和pRSET-B。

5.根據權利要求1或4所述的基于切離酶基因編輯技術的定向修復系統，其特征在于，所述質粒載體還包括：pVAX1、PBR322、pbv220、pBluescript II KS(+)、L4440、pCAMBIA-1301、pMAL-p2X、pGD926、pGEX-2T、pGEX-2TK、pGEX-3X、pGEX-4T-1、pGEX-4T-2、pGEX-4T-3、pGEX-5X-1、pGEX-5X-2、pGEX-5X-3、pGEX-6P-1、pGEX-6P-2、pGEX-6P-3、PTYB1、PTYB2、PTYB11、PTYB12、pCDNA3.1(-)、pCDNA3.1(+)、pPICZ alpha A、pGAPZαA、PYES2.0、pBI121、pEGFP-N1、pEGFP-C1、pPIC9K、pPIC3.5K、PX459、PX458、pAAV、PX462、pUC ori vector、plenti、pFUGW、pAAV、EF1a-lenti、Ai9、pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9、pCAGEN、pcDNA3.1和pHKO_23。