[發明專利]ApoE基因缺失斑馬魚的制備在審
| 申請號： | 202110044945.3 | 申請日： | 2021-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN112695034A | 公開（公告）日： | 2021-04-23 |
| 發明（設計）人： | 汪利平 | 申請（專利權）人： | 汪利平 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/89;A01K67/027;A01K61/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | apoe 基因 缺失 斑馬 制備 | ||
【權利要求書】：
1.ApoE基因缺失斑馬魚的制備，其特征在于，包括以下步驟：
1)根據ApoE基因序列，確定ApoE靶位點；
2)根據ApoE靶位點，設計Oligo序列；
3)構建gRNA體外轉錄載體；
4)PCR獲得gRNA體外轉錄模板；
5)對步驟4獲得的模板進行體外轉錄，得到gRNA；
6)制備Cas9 mRNA的體外轉錄模板；
7)體外轉錄Cas9 mRNA；
8)添加polyA序列、回收Cas9 mRNA；
9)將Cas9 mRNA和gRNA混合，注射到單細胞期斑馬魚胚胎中；
10)將F0胚胎飼養至性成熟；
11)與野生型成魚外交，篩選F0；
12)選取可產生有效突變的F0自交，篩選F1；
13)從F1代突變體中挑選相同突變的雌魚和雄魚，雜交得到F2代；
14)篩選ApoE基因敲除純合子即為穩定遺傳的ApoE基因缺失斑馬魚。
2.如權利要求1所述的ApoE基因缺失斑馬魚的應用，所述的ApoE基因缺失斑馬魚用于阿爾茲海默癥、骨質疏松、冠心病疾病的研究。
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