[發明專利]一種人源化抗體表達載體的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 202110042810.3
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112608944B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 楊玲玲;李因來
• 申請（專利權）人: 杭州博岳生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C07K16/26
• 代理公司: 浙江和納律師事務所 33314
• 代理人: 石仕福

本發明公開一種人源化抗體表達載體的構建方法，將堿基組成如SEQ ID NO:2所示的人源抗體Kappa的輕鏈恒定區基因序列CL在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H?Kappa?CL質粒；將堿基組成如SEQ ID NO:1所示的人源抗體Gamma1的重鏈恒定區基因序列在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H?Gamma1?CH質粒；本發明還公開了一種人源化抗體表達載體的應用方法。該方法實驗操作簡單，可縮短產品的研發周期，適用于大多數抗體的人源化改造。

技術領域

本發明涉及人源化抗體的載體構建領域，具體為一種人源化抗體表達載體的構建方法及其應用。

背景技術

由于單克隆抗體的高度特異性，使其在細胞生物學、基礎醫學、臨床診斷、治療等領域得到了廣泛的應用。基因工程抗體因為其成本低，產量高和易純化等特點，現已廣泛應用于生物制藥和體外診斷領域。但同時單克隆抗體也存在一些缺陷，鼠源性抗體應用于體外診斷時會產生抗鼠抗體反應（HAMA）。為了克服單克隆抗體的這一缺點，利用基因工程技術制備嵌合抗體，人源化抗體等，在盡量保留原有抗體的特異性的前提下減少了抗體中的鼠源成分。

現有技術的人源化抗體表達載體的構建方法實驗操作簡單一般操作復雜，如中國專利（專利號為ZL201310737306.0）的人源化抗體表達載體及其構建方法，該方法實驗操作復雜，還涉及引物的設計和PCR程序設計與操作，一方面對實驗室的設備有要求，另一方面，也增加了人源化抗體表達載體的構建難度，不利于產品的降低研發周期時間，因此降低了該方法的適用范圍，并且該方法只能適用于有限的抗體的人源化改造。

綜上，本領域技術人員亟需一種實驗操作簡單的人源化抗體表達載體的構建方法，可縮短產品的研發周期，且適用于大多數抗體的人源化改造。

發明內容

針對上述存在的問題，本發明的目的是開發一種人源化抗體表達載體的構建方法及其應用，為方便鼠源抗體的結構改造，制備了一個含人源Gamma1恒定區基因序列真核表達質粒H-Gamma1-CH，和人源Kappa恒定區基因序列質粒H-Kappa-CL，用于快速進行基因工程抗體的人源化改造。

以解決上述一方面的問題，本發明的技術方案是：

一種人源化抗體表達載體的構建方法，將堿基組成如SEQ ID NO:2所示的人源抗體Kappa的輕鏈恒定區基因序列CL在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H-Kappa-CL質粒。

優選的，人源抗體Kappa的輕鏈可變區序列CL編碼具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的蛋白質。

以解決上述又一方面的問題，本發明的技術方案是：

一種人源化抗體表達載體的構建方法，將堿基組成如SEQ ID NO:1所示的人源抗體Gamma1的重鏈恒定區基因序列在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H-Gamma1-CH質粒。

優選的，人源抗體Gamma1的重鏈可變區序列編碼具有SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的蛋白質。

以解決上述又一方面的問題，本發明的技術方案是：

一種上述的人源化抗體表達載體的應用方法，將H-Kappa-CL質粒和H-Gamma1-CH質粒轉入哺乳動物細胞進行人源化抗體的生產。

優選的，將人源化抗體的輕鏈可變區和重鏈可變區使用同源重組的方法分別插入進H-Kappa-CL質粒和H-Gamma1-CH質粒中，然后共同轉染進哺乳動物的表達細胞，得到人源化抗體。