[發明專利]一種人源化抗體表達載體的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 202110042810.3
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112608944B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 楊玲玲;李因來
• 申請（專利權）人: 杭州博岳生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C07K16/26
• 代理公司: 浙江和納律師事務所 33314
• 代理人: 石仕福

1.一種人源化抗體表達載體的構建方法，其特征在于，

將堿基組成如SEQ ID NO:2所示 的人源抗體Kappa的輕鏈恒定區基因序列CL在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上 HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H-Kappa-CL質粒；

所述人源抗體Kappa的輕鏈可變區序列CL 編碼具有SEQ ID NO .3所示的氨基酸序列的蛋白質；

將堿基組成如SEQ ID NO:1所示 的人源抗體Gamma1的重鏈恒定區基因序列在DNA序列5’端加上EcoRⅠ酶切位點，3’端加上 HindⅢ酶切位點，然后與真核表達載體連接，得到H-Gamma1-CH質粒；

所述人源抗體Gamma1的重鏈可變區序列編 碼具有SEQ ID NO .4所示的氨基酸序列的蛋白質。

2.一種以權利要求1所述方法構建的人源化抗體表達載體的應用方法，其特征在于，

將H-Kappa-C質粒和H-Gramma1- CH質粒轉入哺乳動物細胞進行人源化抗體生產；

將人源化抗體的輕鏈可變區使用同源重組的方法插入進H-Kappa-CL質粒中，將人源化抗體的重鏈可變區使用同源重組的方法插 入H-Gamma1-CH質粒中，然后共同轉染進哺乳動物的表達細胞，得到人源化抗體。

3.根據權利要求2所述的應用方法，其特征在于，將H-Kappa-CL質粒和H-Gamma1-CH質粒共同轉染進哺乳動物表達細胞，培養7天后進行離心，收集細胞上清液，得到人源化抗體。

4.根據權利要求3所述的應用方法，其特征在于，使用protein A對所述細胞上清液進行純化，SDS-PAGE檢測人源化抗體的蛋白質結構完整性。

5.根據權利要求3或4所述的應用方法，其特征在于，使用Elisa法檢測人源化抗體的效價。