[發明專利]利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法

有效

• 申請號: 202110041660.4
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112430675B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 蘇松坤;黃安;張曌楠;李志國;聶紅毅;黃景南
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明涉及一種利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法，包括蜜蜂幼蟲個體取樣、蜜蜂幼蟲樣本DNA提取、合成引物、PCR檢測和鑒別中華蜜蜂抗囊狀幼蟲病性狀，根據從該蜂群中隨機收集的工蜂幼蟲個體在SNP標記KZ288474.1_322717出現G基因的頻率P_G和C基因的頻率P_C之間是否存在顯著差異，鑒別中華蜜蜂抗囊狀幼蟲病性狀。本發明從分子水平，提供了使用中華蜜蜂工蜂幼蟲抗囊狀幼蟲病相關的SNP（KZ288474.1_322717）標記，科學、準確、快速地鑒別中華蜜蜂抗囊狀幼蟲病性能，可以大大縮短抗囊狀幼蟲病中華蜜蜂的選育周期，加快蜜蜂育種速度。

技術領域

本發明涉及一種鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法，具體涉及一種利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法，屬生物技術領域。

背景技術

蜜蜂病毒性疾病的流行是影響養蜂業健康發展的重要問題，造成全球經濟損失。蜜蜂囊狀幼蟲病（Sacbrood virus, SBV）是威脅中華蜜蜂（Apis cerana cerana，簡稱中蜂）健康的主要疾病之一。蜜蜂易被多種病原體感染，其中，囊狀幼蟲病毒及其他因素對蜜蜂種群的健康存在嚴重的威脅。囊狀幼蟲病病毒最易感染幼蟲，也可以感染成年蜜蜂。蜜蜂種群中特別是中華蜜蜂中普遍存在囊狀幼蟲病毒。囊狀幼蟲病毒可造成個體蜜蜂的死亡甚至整個蜂群的消失。目前，能夠有效治愈囊狀幼蟲病且不影響蜂產品質量的藥物尚未報道，最好的解決方法是培育抗病品種。因此，我們開展了中蜂囊狀幼蟲病相關的單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）抗病分子標記的研究。一直以來，我國的蜂業科技工作者致力于抗中囊病蜜蜂的相關研究，以期發現抗中囊病機制和抗中囊病性狀相關的遺傳標記等，加強抗中囊病蜂種的保種和選育工作，充分發揮我國優良蜂種資源的優勢。關于抗中囊病性狀相關研究、分子標記意義和SNP技術及其在蜜蜂研究領域的應用等方面進行的研究概述如下：

1、遺傳標記的研究進展

（1）遺傳標記：是表型易于識別的等位基因或遺傳物質（郭春燕，2014），遺傳標記的發展經歷了最初的形態學標記階段，然后經過細胞學標記、生物化學標記、免疫學標記階段，一直到現在被廣泛使用的分子標記，大體共經過了這五個階段。外部形態標記與解剖學形態標記都屬于形態學標記，都是肉眼可以識別的外部形態特征。細胞學標記是對染色體的形態、數目等方面的分析。生物化學標記則是把生物體內的個別生物化學性狀作為遺傳標記，比如在蜂學領域使用較多的同工酶標記等。免疫學標記則是以白細胞抗原和紅細胞抗原等免疫學的特征作為遺傳標記。分子標記的發展主要經歷了第一代限制性片段長度多態性（Restriction Fragment Length Polymorphisms, RFLPs）、第二代的微衛星標記（Short Tandem Repeats, STRs）、第三代的單核苷酸多態性（SNPs）及正在起步發展的第四代基因拷貝數變異（copy number variants, CNVs）。和 SNPs 相比，目前CNVs仍處于發展階段，檢測技術沒有SNPs成熟，但是 CNVs 的核苷含量更多，突變率更高，檢測 CNVs 可檢測出 SNPs 檢測不出的重要位點，兩種方法具有互補性（劉小彥等，2016；許曉芳，2012）。

（2）RFLPs 的特點與應用：RFLPs 分析技術可以不考慮顯隱性以及環境的影響，被廣泛應用于 DNA 多態性的研究。但是 RFLPs 多態性信息含量比較低，操作繁瑣，且對于DNA 樣本需求多，質量要求高（郭春燕，2014）。