[發(fā)明專利]利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110041660.4 | 申請日： | 2021-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN112430675B | 公開（公告）日： | 2022-07-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 蘇松坤;黃安;張曌楠;李志國;聶紅毅;黃景南 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建農(nóng)林大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 饒文君;蔡學俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 snp 標記 kz288474 _322717 鑒別 蜂群 抗囊狀 幼蟲 性狀 方法 | ||
1.一種利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法，其特征在于：鑒別步驟如下：
（1）蜜蜂幼蟲取樣：從被檢測的中華蜜蜂蜂群中，收集工蜂幼蟲個體，隨機取樣，每群以100只幼蟲代表整個蜂群，將蜜蜂樣本置于-80℃冰箱中冷凍備用；
（2）蜜蜂幼蟲DNA的提取：分別將步驟（1）中冷凍的幼蟲，進行組織破碎，提取基因組DNA，并進行DNA濃度和純度測定；
（3）合成引物：引物對Primer-F和Primer-R的序列如下：
Primer-F：5’-TTATTATTCGCAGCGTGTCG-3’，
Primer-R：5’-GCTTGCAGCACATCCACTAA-3’；
（4）PCR檢測：以步驟（2）幼蟲DNA為模版，以Primer-F和Primer-R為引物進行PCR；
反應(yīng)的體系為：總體積25μL，內(nèi)含反應(yīng)混合物Mix 12.5μL，Primer-F 0.4μL，
Primer-R 0.4μL，DNA模版2μL，ddH2O 9.7μL；
反應(yīng)的條件為：94 ℃預(yù)變性；94℃變性15s，57℃退火30s，72℃延伸1min，共35個循環(huán)；72℃延伸5min；
對PCR反應(yīng)產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，將出現(xiàn)目的條帶的PCR反應(yīng)液進行測序；
（5）鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀：將步驟（4）的測序結(jié)果用Alignment軟件進行序列比對分析，計算被檢測蜂群KZ288474.1_322717位點的基因頻率，根據(jù)蜂群的G基因頻率PG值，鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病能力強弱。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用SNP標記KZ288474.1_322717鑒別蜂群抗囊狀幼蟲病性狀的方法，其特征在于：當蜂群的G基因頻率PG顯著大于C等位基因頻率PC時，此蜂群為抗囊狀幼蟲病蜂群，所述顯著指統(tǒng)計學的P0.05。
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