[發明專利]一種低溫活性改良的外切菊粉酶突變體MutDR121EH9

有效

• 申請號: 202110041629.0
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112831485B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 張蕊;周峻沛;黃遵錫;岑瀟龍;許波;韓楠玉;唐湘華;李俊俊;吳倩;高艷秀
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

1.一種低溫活性改良的外切菊粉酶突變體MutDR121EH9，其特征在于，該突變體MutDR121EH9的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.如權利要求1所述的突變體MutDR121EH9的編碼基因mutDR121EH9，其特征在于，所述編碼基因mutDR121EH9的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.包含如權利要求2所述的編碼基因mutDR121EH9的重組載體。

4.包含如權利要求2所述的編碼基因mutDR121EH9的重組菌。

5.如權利要求1所述的突變體MutDR121EH9的制備方法，其特征在于，該方法包含：

將核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表達載體pEasy-E1相連接，獲得包含inuAMN8的重組表達質粒pEasy-E1-inuAMN8；

以質粒pEasy-E1-inuAMN8為模板，以如SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.

8所示核苷酸序列的突變引物，通過PCR擴增得到包含mutDR121EH9的重組表達質粒pEasy-E1-mutDR121EH9；

將重組表達質粒pEasy-E1-mutDR121EH9轉化大腸桿菌BL21(DE3)，獲得包含mutDR121EH9的重組菌株；

培養重組菌株，誘導重組外切菊粉酶突變體MutDR121EH9表達，以獲得重組外切菊粉酶突變體MutDR121EH9。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述包含mutDR121EH9的重組菌株的制備為，將所述重組表達質粒pEasy-E1-mutDR121EH9經DpnI酶消化，利用MutIIFast?Mutagenesis?Kit試劑盒將消化產物進行連接，再通過熱激方式轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述誘導采用IPTG進行誘導。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述重組外切菊粉酶突變體MutDR121EH9表達的產物經Nickel-NTAAgarose和0–500mM的咪唑分別親和和純化，獲得重組外切菊粉酶突變體MutDR121EH9。

9.如權利要求1所述的突變體MutDR121EH9在食品中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的突變體MutDR121EH9在釀酒中的應用。