[發明專利]具有磷脂酶C活性的多肽以及對其進行編碼的多核苷酸

在審

• 申請號: 202110040263.5
• 申請日: 2013-12-11
• 公開（公告）號: CN112852777A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 孫天齊;劉曄;李明;K·博克
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55;C12N15/82;C12N5/10;A23D9/04
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 邰紅;郭煜

本發明涉及具有磷脂酶C活性的分離的多肽和編碼這些多肽的多核苷酸。本發明還涉及包括這些多核苷酸的核酸構建體、載體以及宿主細胞連同產生和使用這些多肽的方法。

本申請是申請日為2013年12月11日、申請號為201380064230.8、發明名稱為“具有磷脂酶C活性的多肽以及對其進行編碼的多核苷酸”的發明專利申請的分案申請。

對序列表的引用

本申請包括一個計算機可讀形式的序列表，將其通過引用結合在此。

發明背景

發明領域

本發明涉及具有磷脂酶C活性的多肽和編碼這些多肽的多核苷酸。本發明還涉及包括這些多核苷酸的核酸構建體、載體以及宿主細胞連同產生和使用這些多肽的方法。

另外，本發明涉及通過利用具有磷脂酶C活性的酶來降低包括高量的非水合磷的食用油中的含磷組分的含量的方法。

相關技術說明

己知幾種類型的磷脂酶，根據磷脂分子中受到攻擊的鍵的位置，這些磷脂酶在其特異性方面存在不同。磷脂酶A1(PLA1)去除1-位的脂肪酸而產生游離的脂肪酸和1-溶血-2-酰基磷脂。磷脂酶A2(PLA2)去除2-位的脂肪酸而產生游離的脂肪酸和1-酰基-2-溶血磷脂。將術語磷脂酶B(PLB)用于具有A1和A2兩者活性的磷脂酶。磷脂酶C(PLC)去除磷酸部分而產生1,2二酰甘油和磷酸脂。磷脂酶D(PLD)產生1,2-二酰甘油-磷酸和堿性基團。

具有磷脂酶C活性的多肽可應用于工業方法，例如用于精煉植物油。在消費之前，將植物油脫膠以提供精煉的儲藏穩定性植物油，其具有中性味道和淺顏色。該脫膠方法包括從富含甘油三酯的油級分去除磷脂組分(膠)。

傳統上，該脫膠方法已基于水提取、酸亦或堿處理，隨后是分離方法。由于磷脂組分的乳化特性，該脫膠過程已導致油(即甘油三酯)的損失。

由于磷脂的有效水解(其減少了乳化特性)，酶促脫膠降低了油損失。對于具有磷脂酶C活性且適用于在食用油的酶促脫膠中應用的另外的酶存在著需要。

一種具有磷脂酶C活性且與本發明的酶有88％序列一致性的酶從WO 2012062817中已知。

發明概述

諸位發明人已經從青霉屬菌株或更具體地從2007年發現于中國的埃默森青霉菌的菌株中分離一種具有磷脂酶C活性的新酶。因此，本發明提供了具有磷脂酶C活性的新穎多肽和編碼這些多肽的多核苷酸。

本發明涉及具有磷脂酶C活性的分離的多肽，這些分離的多肽選自下組，該組由以下各項組成：

(a)一種多肽，該多肽與SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少90％的序列一致性；

(b)一種由以下多核苷酸編碼的多肽，該多核苷酸在非常高嚴格條件下與(i)SEQID NO:1的成熟多肽編碼序列、或(ii)(i)的全長互補體雜交；

(c)一種多肽，該多肽由與SEQ ID NO:1的成熟多肽編碼序列具有至少90％序列一致性的多核苷酸編碼；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的一種變體，該變體在一個或多個(例如，若干個)位置處包括取代、缺失、和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一個片段，該片段具有磷脂酶C活性。

本發明還涉及編碼本發明多肽的分離的多核苷酸；核酸構建體；重組表達載體；包括這些多核苷酸的重組宿主細胞；以及產生這些多肽的方法。

本發明還涉及包含本發明的這些多肽的組合物。

本發明還涉及上述多肽或上述組合物在磷脂水解的方法中，諸如在降低食用油中的磷脂含量的方法中的用途。