[發明專利]一種外泌體膜蛋白作為結腸癌診斷標志物的應用以及結腸癌早期診斷試劑盒

有效

• 申請號: 202110039502.5
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112379096B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 肖瀟;童坤;黃磊;張碩
• 申請（專利權）人: 江蘇申基生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 黃凱

本申請公開了一種外泌體膜蛋白作為結腸癌診斷標志物的應用以及結腸癌早期診斷試劑盒，屬于生物醫學技術領域。本申請通過實驗確定了外泌體的CD33和CD147蛋白可以作為結腸癌診斷標志物，對其進行檢測可以實現對結腸癌的早期精確診斷。本申請針對外泌體CD33和CD147蛋白還提出了一種結腸癌早期診斷試劑盒，包括免疫磁珠、兔抗人CD33抗體、鼠抗人CD147抗體、羊抗兔熒光二抗、羊抗鼠熒光二抗和緩沖液。本申請試劑盒結合流式細胞術可以對待測樣本血清外泌體的CD33和CD147蛋白進行定量檢測，并通過與閾值進行簡單比較，便可判定待測樣本結腸癌的陰陽性，檢測結果準確、可靠。

技術領域

本申請涉及生物醫學技術領域，特別涉及一種外泌體膜蛋白作為結腸癌診斷標志物的應用以及結腸癌早期診斷試劑盒。

背景技術

結腸癌是常見的發生于結腸部位的消化道惡性腫瘤，在全世界范圍內，結直腸癌是第三大常見的癌癥。據估算，2018年全球新增180萬腸癌患者，占所有癌癥的10%；86萬人因腸癌死亡，位居癌癥死亡譜第二位。在我國，結直腸癌的發病率和病死率在過去10年中都呈持續上升趨勢，逐漸與歐美國家“看齊”。據估算，我國腸癌每年新增發病人數約38萬，位列所有癌癥種類第三位；死亡人數約19萬，位居癌癥死亡譜第五位。

絕大多數腸癌是由腺瘤發展而來，早期腸癌基本上沒有癥狀。從良性息肉發展為腸癌通常需要5～15年。當發現結直腸息肉和腺瘤時，及時通過手術將息肉或腺瘤切除，就能杜絕其演變為腸癌。腸癌預后與臨床分期密切相關。目前，早期腸癌可以通過外科手術治愈，5年生存率高達90%；中期腸癌需要接受以手術、放療和化療相結合的多學科治療，也可以獲得理想療效；而晚期腸癌的5年生存率只有10%~20%。

由于結腸癌早期癥狀不明顯，常被漏診。目前，結腸癌診斷主要依靠影像學檢查，包括腸鏡、腹部CT，結腸鏡及通過結腸鏡下活組織病理學檢查是腸癌篩查、診斷的金標準，然而腸鏡不適用于普通人群的篩查。而已有的血清學檢測指標CEA并不能完全代表結腸癌的病情，對于結腸癌早期診斷的靈敏度及特異性均難達到要求。因此，適用于臨床結腸癌早期診斷的檢測方法亟待開發。

發明內容

針對現有的結腸癌早期診斷方法準確度不高，容易漏診的問題，本申請提供一種外泌體膜蛋白作為結腸癌診斷標志物的應用以及結腸癌早期診斷試劑盒。

第一方面，本申請提供一種外泌體膜蛋白的檢測試劑在制備用于結腸癌診斷的產品中的應用，通過以下技術方案得以實現。

一種外泌體膜蛋白的檢測試劑在制備用于結腸癌診斷的產品中的應用，所述外泌體膜蛋白為CD33蛋白和CD147蛋白。

通過采用上述技術方案，本申請通過對正常細胞系和結腸癌細胞系的外泌體蛋白進行蛋白組學分析，發現CD33及CD147兩種膜蛋白存在于結腸癌細胞系外泌體中，而在正常細胞系中未能鑒定到。由此，初步確定CD33及CD147可以作為結腸癌的潛在判斷指標。為了驗證以上結論的準確性，本申請又通過Western Blot方法檢測結腸癌、腸道息肉、腸炎和健康獻血者血清外泌體中CD33及CD147的表達情況，發現CD33及CD147只在結腸癌患者血清外泌體中高表達，從而進一步確定CD33及CD147可以作為結腸癌診斷標志物。

本申請將在結腸癌患者血清外泌體中特異性表達的CD33及CD147兩種膜蛋白作為結腸癌診斷標志物，與現有的血清學檢測指標CEA相比，提高了結腸癌早期診斷的特異性，檢測結果能夠完全反映結腸癌的病情；與腸癌篩查、診斷的金標準影像學檢查方法相比，提高了結腸癌早期診斷的靈敏度，降低了由于結腸癌早期癥狀不明顯而漏診的發生率。

可選的，所述外泌體膜蛋白來源于血清。

通過采用上述技術方案，外泌體廣泛存在于各種體液中，例如血液、淋巴液、唾液、尿液、精液和乳汁等，由于其他體液外泌體中CD33及CD147蛋白含量較低或難以測定，所以本申請將血液作為樣本來源，檢測血清外泌體的CD33及CD147兩種膜蛋白含量，可以提高檢測結果的準確性，且檢測樣本易于獲得。