[發(fā)明專利]靶向編輯VEGFA基因外顯子區(qū)域的gRNA及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110037499.3
• 申請(qǐng)日: 2021-01-12
• 公開（公告）號(hào): CN112662674B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁峻彬;張虹;徐輝;古博;皇甫德勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州瑞風(fēng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;A61K31/7105;A61K48/00;A61P3/10;A61P13/12;A61P15/08;A61P17/06;A61P19/02;A61P27/02;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 李海恬;劉杉

本發(fā)明涉及一種靶向編輯VEGFA基因外顯子區(qū)域的gRNA及其應(yīng)用，屬于基因編輯技術(shù)領(lǐng)域。所述gRNA序列靶向破壞VEGFA基因的的外顯子區(qū)域，所述gRNA序列的靶向結(jié)構(gòu)域序列選自SEQ?ID?NO:5?21，SEQ?ID?NO:25?53中任一所示基礎(chǔ)序列，或與所述基礎(chǔ)序列相似性≥90％的擴(kuò)展序列。采用該gRNA序列，特異性靶向破壞VEGFA基因啟動(dòng)子區(qū)域而有效降低VEGFA?mRNA水平。從而治療癌癥、年齡相關(guān)性黃斑變性、糖尿病腎病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬皮膚、卵巢過度刺激綜合征等有關(guān)疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因編輯技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種靶向編輯VEGFA基因外顯子區(qū)域的gRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

血管內(nèi)皮生長因子A(Vascular?endothelial?growth?factor?A,VEGFA)參與的新生血管信號(hào)通路調(diào)控多種生物體生理過程及疾病相關(guān)信號(hào)通路，如從胚胎發(fā)育到各個(gè)器官、組織的血管新生過程。當(dāng)特定組織或器官處于缺氧狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞中VEGFA會(huì)被缺氧誘導(dǎo)因子HIF轉(zhuǎn)錄因子激活并表達(dá)上調(diào)，表達(dá)上調(diào)的VEGFA結(jié)合其受體，激活新生血管信號(hào)途徑，為機(jī)體提供養(yǎng)分。而在各種癌癥等疾病中，組織均處于缺氧狀態(tài)，VEGFA都會(huì)被顯著性上調(diào)表達(dá)，激活新生血管途徑。研究發(fā)現(xiàn)，VEGFA相關(guān)新生血管信號(hào)途徑會(huì)在各種病理過程中上調(diào)，如肺癌、乳腺癌、肝癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等各種癌癥病程，以及糖尿病腎病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬皮膚、卵巢過度刺激綜合征等各大疾病中VEGF明顯上調(diào)表達(dá)。

已經(jīng)上市VEGF抗體阿柏西普及正在臨床試驗(yàn)的過表達(dá)anti-VEGF的藥物RGX-314都被用于治療糖尿病性黃斑水腫(diabetic?macular?edema，DME)，視網(wǎng)膜靜脈閉塞后斑斑水腫(Macular?Edema?Following?Retinal?Vein?Occlusion，RVO)、糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic?Retinopathy，DR)等，且效果較佳。拜耳公司的anti-VEGF阿柏西普(Aflibercept)用于結(jié)直腸癌的試驗(yàn)已經(jīng)處于臨床三期，同時(shí)用于非小細(xì)胞肺癌也處于臨床三期試驗(yàn)?；蛱┛斯镜腁nti-VEGF貝伐珠單抗(Bevacizumab)用于治療結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤母細(xì)胞瘤和腎癌等，治療結(jié)腸癌和乳腺癌的臨床試驗(yàn)已經(jīng)進(jìn)入三期。但頻繁玻璃體注射抗體藥嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量，因此開發(fā)一款永久性下調(diào)VEGFA的藥物對(duì)于人類健康具有極強(qiáng)的必要性和緊迫性。

年齡相關(guān)性黃斑變性(age?related?macular?degeneration,AMD)已成為全球50歲以上老年人的首要致盲原因，造成不可逆轉(zhuǎn)的視力損傷。AMD分為干性或稱萎縮性和新生血管性或稱濕性。其中10-15％為新生血管性年齡相關(guān)性黃斑變性(neovascular?agerelated?macular?degeneration，nAMD)，是引起視力喪失的最主要原因之一。nAMD患者臨床癥狀為逐漸或突然產(chǎn)生嚴(yán)重視力障礙，眼底出血、滲出并伴有脈絡(luò)膜新血管生成及黃斑區(qū)盤狀瘢痕。新生血管性年齡相關(guān)性黃斑變性發(fā)病始于50歲，在60歲以上老年人群中發(fā)病率高達(dá)13％。目前研究已證明，nAMD的關(guān)鍵分子機(jī)制是視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinalpigment?epithelium,RPE)因遺傳或外界壓力刺激過量表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial?growth?factor,VEGFA)，從而激活新血管生成信號(hào)通路，造成視網(wǎng)膜滲血，嚴(yán)重?fù)p傷視力。因此，通過眼部玻璃體注射VEGF抗體藥，能夠有效抑制視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜新血管生成和中央視力損傷的惡化。

玻璃體注射VEGF抗體藥是目前治療nAMD效果較好且市場(chǎng)份額最大的治療方案。然而所有VEGF抗體藥均需每隔1-3個(gè)月進(jìn)行玻璃體注射，過于頻繁的玻璃體注射以及高昂費(fèi)用，帶給老年人難以承受的術(shù)后生活和經(jīng)濟(jì)壓力。