[發(fā)明專利]一種造血干細胞增殖及制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110037095.4
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112795540A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發(fā)明（設計）人: 趙彬
• 申請（專利權(quán)）人: 趙彬
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種造血干細胞增殖及制備方法，通過CD52激動劑刺激含的單核細胞而使造血干細胞細胞活化，在CD52激動劑以15μg/ml以下的濃度存在的培養(yǎng)基中對單核細胞進行刺激，同時在培養(yǎng)基中加入端粒酶，所述端粒酶由西蘭花端粒酶提取物提取，將西蘭花花蕾放入研缽中加入液氮研磨成粉，再加入提取液繼續(xù)研磨10?20min，研磨后轉(zhuǎn)入離心管中離心15?20min，將上清液分裝至EP管中，在EP管中加入PEG6000，4?7℃恒溫下振蕩混合40?60min，在4?7℃條件下離心2?4min，去上清液，取下層物質(zhì)在?80℃下保存，即得西蘭花端粒酶提取物。該造血干細胞增殖及制備方法，在培養(yǎng)基中加入端粒酶，將端粒酶技術(shù)應用于造血干細胞增殖中，端粒酶的添加可以加快造血干細胞的增殖速度，增殖效率得到提高。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及造血干細胞技術(shù)領域，具體為一種造血干細胞增殖及制備方法。

背景技術(shù)

造血干細胞是血液系統(tǒng)中的成體干細胞，是一個異質(zhì)性的群體，具有長期自我更新的能力和分化成各類成熟血細胞的潛能，它是研究歷史最長且最為深入的一類成體干細胞。

現(xiàn)有的造血干細胞增殖及制備方法增殖效率不高，增殖速度較慢，滿足不了實際的需求的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種造血干細胞增殖及制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的現(xiàn)有的造血干細胞增殖及制備方法增殖效率不高，增殖速度較慢，滿足不了實際的需求的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種造血干細胞增殖及制備方法，通過CD52激動劑刺激含的單核細胞而使造血干細胞細胞活化，在CD52激動劑以15μg/ml以下的濃度存在的培養(yǎng)基中對單核細胞進行刺激，同時在培養(yǎng)基中加入端粒酶，所述端粒酶由西蘭花端粒酶提取物提取，將西蘭花花蕾放入研缽中加入液氮研磨成粉，再加入提取液繼續(xù)研磨10-20min，研磨后轉(zhuǎn)入離心管中離心15-20min，將上清液分裝至EP管中，在EP管中加入PEG6000，4-7℃恒溫下振蕩混合40-60min，在4-7℃條件下離心2-4min，去上清液，取下層物質(zhì)在-80℃下保存，即得西蘭花端粒酶提取物，將得到的西蘭花端粒酶提取物添加到培養(yǎng)基中，然后再使用CD3激動劑以0.08μg/ml以下的濃度存在的培養(yǎng)基中對單核細胞進行刺激。

可選的，所述端粒酶由端粒酶RNA鏈和蛋白質(zhì)組成。

優(yōu)選的，所述端粒酶的制備中離心采用核酸提取離心機進行離心。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基在使用前測試并調(diào)節(jié)pH，進行高溫滅菌和過濾滅菌進行消毒。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH：用剪刀剪下一小片ph試紙，以玻璃棒蘸取待測培養(yǎng)基，同時與比色板對照顏色，測定所配培養(yǎng)基的ph，若培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可以1mol/lNaOH或1mol/l HCL溶液逐滴緩慢加入，邊加邊攪拌，并隨時用ph試紙測試，直至達到所需ph為止。

優(yōu)選的，所述高溫滅菌采用煮沸滅菌法，在水中加入碳酸氫鈉配制成2％溶液。

優(yōu)選的，所述過濾滅菌利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去液體或氣體中微生物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：該造血干細胞增殖及制備方法，在培養(yǎng)基中加入端粒酶，將端粒酶技術(shù)應用于造血干細胞增殖中，端粒酶的添加可以加快造血干細胞的增殖速度，增殖效率得到提高，從而可以滿足使用者的需求，培養(yǎng)基在使用前測試并調(diào)節(jié)pH，從而可以保證培養(yǎng)基的環(huán)境，有利于細胞增殖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。