[發明專利]一種造血干細胞增殖及制備方法

在審

• 申請號: 202110037095.4
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112795540A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 趙彬
• 申請（專利權）人: 趙彬
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于，通過CD52激動劑刺激含的單核細胞而使造血干細胞細胞活化，在CD52激動劑以15μg/ml以下的濃度存在的培養基中對單核細胞進行刺激，同時在培養基中加入端粒酶，所述端粒酶由西蘭花端粒酶提取物提取，將西蘭花花蕾放入研缽中加入液氮研磨成粉，再加入提取液繼續研磨10-20min，研磨后轉入離心管中離心15-20min，將上清液分裝至EP管中，在EP管中加入PEG6000，4-7℃恒溫下振蕩混合40-60min，在4-7℃條件下離心2-4min，去上清液，取下層物質在-80℃下保存，即得西蘭花端粒酶提取物，將得到的西蘭花端粒酶提取物添加到培養基中，然后再使用CD3激動劑以0.08μg/ml以下的濃度存在的培養基中對單核細胞進行刺激。

2.根據權利要求1所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述端粒酶由端粒酶RNA鏈和蛋白質組成。

3.根據權利要求1所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述端粒酶的制備中離心采用核酸提取離心機進行離心。

4.根據權利要求1所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述培養基在使用前測試并調節pH，進行高溫滅菌和過濾滅菌進行消毒。

5.根據權利要求4所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述培養基調節pH：用剪刀剪下一小片ph試紙，以玻璃棒蘸取待測培養基，同時與比色板對照顏色，測定所配培養基的ph，若培養基偏酸或偏堿時，可以1mol/l NaOH或1mol/l HCL溶液逐滴緩慢加入，邊加邊攪拌，并隨時用ph試紙測試，直至達到所需ph為止。

6.根據權利要求4所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述高溫滅菌采用煮沸滅菌法，在水中加入碳酸氫鈉配制成2％溶液。

7.根據權利要求4所述的一種造血干細胞增殖及制備方法，其特征在于：所述過濾滅菌利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去液體或氣體中微生物。