[發明專利]一種別熊去氧膽酸的合成方法

在審

• 申請號: 202110035300.3
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112813128A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 秦和平;張和平;祝國祥;林志鋒;凌芬娜
• 申請（專利權）人: 中山百靈生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12P33/02
• 代理公司: 中山市科創專利代理有限公司 44211
• 代理人: 毛海娟

本發明公開了一種別熊去氧膽酸的合成方法，該方法以別鵝去氧膽酸為起始原料，加入磷酸緩沖液、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、乳酸脫氫酶、7?α類固醇脫氫酶、丙酮酸鈉，進行反應，高溫滅活酶后再降溫；再加入L?蘋果酸鈉、蘋果酸脫氫酶、7?β類固醇脫氫酶反應，高溫滅活酶后再降至常溫；再經過濾、洗滌、干燥等步驟得到別熊去氧膽酸。全過程包括別鵝去氧膽酸的氧化反應、還原反應步驟，合成別熊去氧膽酸。該方法整個反應過程在水溶液中進行，不使用有機溶劑，工藝簡單、容易操作，得到的別熊去氧膽酸的純度達到98.5％以上，可作藥學研究機構進行毒理藥理等藥學性質樣品使用，也可以作為熊去氧膽酸質量研究時的雜質對照品使用。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種別熊去氧膽酸的合成方法。

背景技術

熊去氧膽酸UDCA是一種無毒性親水膽酸，能競爭性地抑制毒性內源性膽酸在回腸的吸收，通過激活鈣離子、蛋白激酶C組成的信號網絡，并通過激活分裂活性蛋白基酶來增加膽汁淤積的作用。熊去氧膽酸還能競爭性地取代細胞磨合細胞器上的毒性膽酸分子，防止肝細胞和膽管細胞受到更多毒性膽酸的損害。在臨床上，熊去氧膽酸主要用于溶解膽固醇型膽結石，原發性膽汁肝硬化PBC，慢性丙型肝炎，同時還用于酒精性肝病，非酒精性脂肪肝、良性復發性肝內膽汁淤積癥、先天性內膽管囊性擴張癥。

隨著人類對熊去氧膽酸認識的不斷深入，熊去氧膽酸的使用量大量增加，原來以膽酸和雞膽汁提取的鵝去氧膽酸為原料合成的熊去氧膽酸產量已經無法滿足人類的需要?，F在市場上出現了一些從鴨膽汁中提取的鵝去氧膽酸為原料合成的熊去氧膽酸。以鴨膽汁為原料提取的鵝去氧膽酸中含有少量的別鵝去氧膽酸，別鵝去氧膽酸通過熊去氧膽酸合成過程中的氧化、還原反應將生成別熊去氧膽酸(3α，7β-二羥基-5α-膽甾烷酸)。別熊去氧膽酸可以用作藥學研究機構對其性質進行研究，也可以作為研究熊去氧膽酸時的雜質對照品。因此制備高純度的別熊去氧膽酸，并對其進行研究具有一定的意義。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種以別鵝去氧膽酸為原料合成別熊去氧膽酸的方法，本方法合成的別熊去氧膽酸純度高，可以用作藥學研究機構進行毒理藥理等藥學性質樣品使用，也可以作為研究熊去氧膽酸時的雜質對照品使用。

為了實現上述目的，本發明采取以下技術方案：

一種別熊去氧膽酸的合成方法，所用原料為別鵝去氧膽酸，包括具體步驟如下：

a.別鵝去氧膽酸的氧化反應

將別鵝去氧膽酸放入反應容器中，加入磷酸緩沖液調節溶液pH至7.5～8.5，溶解，再加入煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、乳酸脫氫酶、7-α類固醇脫氫酶、丙酮酸鈉，控制溶液溫度為25～30℃、pH至7.5～7.8進行反應，直到別鵝去氧膽酸在溶液中的殘留量小于1％；

待反應完成后升溫，攪拌，再降溫；

b.別7-酮基石膽酸的還原反應

在步驟a得到的反應液中加入L-蘋果酸鈉、蘋果酸脫氫酶、7-β類固醇脫氫酶，控制溶液溫度在25～30℃、pH至6.8～7.2進行反應，直到別7-酮基石膽酸在溶液中的殘留濃度小于0.1％；

待反應完成后，加入氫氧化鈉溶液調節溶液pH，升溫、攪拌、再降至常溫，過濾除去溶液中的固形物，濾液加酸調節溶液pH，再過濾、洗滌、干燥得到別熊去氧膽酸。

所述a步驟中磷酸緩沖液的物質的量濃度為50～100mmol/L。

所述a步驟中別鵝去氧膽酸和磷酸緩沖液質量體積比為1g:10ml。

所述a步驟中：

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.10～0.30％；

乳酸脫氫酶的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.10～0.30％；