[發明專利]一種別熊去氧膽酸的合成方法

在審

• 申請號: 202110035300.3
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112813128A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 秦和平;張和平;祝國祥;林志鋒;凌芬娜
• 申請（專利權）人: 中山百靈生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12P33/02
• 代理公司: 中山市科創專利代理有限公司 44211
• 代理人: 毛海娟

1.一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所用原料為別鵝去氧膽酸，包括以下步驟：

a.別鵝去氧膽酸的氧化反應

將別鵝去氧膽酸放入反應容器中，加入磷酸緩沖液調節溶液pH至7.5～8.5，溶解，再加入煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、乳酸脫氫酶、7-α類固醇脫氫酶、丙酮酸鈉，控制溶液溫度為25～30℃、pH至7.5～7.8進行反應，直到別鵝去氧膽酸在溶液中的殘留量小于1％；

待反應完成后升溫，攪拌，再降溫；

b.別7-酮基石膽酸的還原反應

在步驟a得到的反應液中加入L-蘋果酸鈉、蘋果酸脫氫酶、7-β類固醇脫氫酶，控制溶液溫度在25～30℃、pH至6.8～7.2進行反應，直到別7-酮基石膽酸在溶液中的殘留濃度小于0.1％；

待反應完成后，加入氫氧化鈉溶液調節溶液pH，升溫、攪拌、再降至常溫，過濾除去溶液中的固形物，濾液加酸調節溶液pH，再過濾、洗滌、干燥得到別熊去氧膽酸。

2.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述a步驟中磷酸緩沖液的物質的量濃度為50～100mmol/L。

3.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述a步驟中別鵝去氧膽酸和磷酸緩沖液質量體積比為1g:10ml。

4.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述a步驟中：

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.10～0.30％；

乳酸脫氫酶的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.10～0.30％；

7-α類固醇脫氫酶的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.30～0.50％；

丙酮酸鈉的加入量是別鵝去氧膽酸質量的30～50％。

5.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述a步驟反應完成后，將溶液升溫至40～80℃，攪拌20～60min，使所述乳酸脫氫酶和7-α類固醇脫氫酶失活，然后再降溫至25～30℃。

6.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述b步驟中：

L-蘋果酸鈉的加入量是別鵝去氧膽酸質量的40～70％；

蘋果酸脫氫酶的加入量是別鵝去氧膽酸質量的1.0～3.0％；

7-β類固醇脫氫酶的加入量是別鵝去氧膽酸質量的0.10～0.30％。

7.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述b步驟中濾液添加的酸為無機酸。

8.根據權利要求1所述的一種別熊去氧膽酸的合成方法，其特征在于，所述b步驟反應完成后，加入10％氫氧化鈉溶液調節溶液pH至8.0～8.5，升溫至60～80℃，攪拌1～3h，使所述蘋果酸脫氫酶和7-β類固醇脫氫酶失活，再降溫至常溫，過濾除去溶液中的固形物，濾液加酸調節溶液pH至2～3，再過濾、洗滌、干燥得到別熊去氧膽酸。