[發明專利]通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110030584.7
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112881672A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 曹亮;張媛
• 申請（專利權）人: 南京鐘鼎生物技術有限公司;南京華鼎生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/532;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條及其制備方法和應用。本發明的試紙條可以替代核酸擴增檢測環節的儀器如核酸電泳凝膠成像、熒光定量PCR儀、恒溫擴增熒光檢測儀，操作簡便、檢測時間快速、成本低。

技術領域

本發明屬于醫學檢測領域，具體涉及通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

目前，核酸擴增方法包括常規PCR、實時熒光PCR、等溫核酸擴增技術等，上述各核酸擴增技術在疾病診斷、動植物檢疫、食品安全及轉基因檢測等領域廣泛應用。對核酸擴增后的產物，現有技術利用儀器設備進行檢測分析，如通過電泳系統及熒光染色進行紫外顯影分析擴增產物，或者通過其他熒光檢測器進行探測收集數據，因此，核酸產物的檢測對設備的依賴性很強，同時儀器檢測對儀器使用人員的操作技能具有一定要求，從而影響了核酸擴增方法在實驗室外靈活應用，并在很大程度上限制了核酸檢測的廣泛應用場景，如醫學POCT檢測、動植物食品安全等快速的檢測需求無法得到滿足。

膠體金免疫層析法是一種快速的檢測方法。膠體金檢測試劑條主要由樣品墊、背襯(底板)、連接墊(膠體金墊)、檢測線、質檢線、硝酸纖維素膜、吸收墊組成。在試紙條一端的樣品墊上滴加樣品溶液，其受膜的毛細管作用向試紙條的另一端移動，移動過程中被分析物和固定在膜上的某一區域的受體結合固相化，無關物質則通過該區域時被分離，通過膠體金標記物顯色來判定實驗結果。現有技術沒有針對多重核酸產物的通用型膠體金檢測試劑條。

發明內容

本發明的目的在于提供一種通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條。

本發明的再一目的在于提供上述試紙條的其制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述試紙條的應用。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條，所述試紙條包括底板、樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，所述檢測線上包被有FITC單克隆抗體、TAMRA單克隆抗體、DIG單克隆抗體或CY5單克隆抗體中的至少兩種，或者所述檢測線上包被有FAM單克隆抗體、TAMRA單克隆抗體、DIG單克隆抗體或CY5單克隆抗體中的至少兩種；所述金標墊上包被有膠體金標記的生物素單克隆抗體。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條，將包被濃度為0.3mg/mL的FITC單克隆抗體、0.3mg/mL的TAMRA單克隆抗體、0.2mg/mL的DIG抗體單克隆抗體、0.5mg/mL的CY5單克隆抗體或0.3mg/mLFAM單克隆抗體，按1μL/cm的速度噴于硝酸纖維素膜上，作為檢測線。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條，所述質控線上包被有羊抗鼠抗體。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條，將生物素單克隆抗體加入到金標緩沖液中，加入封閉液，混勻，離心,得到沉淀，將沉淀復溶得到膠體金標記的生物素單克隆抗體。

其中，封閉液可選擇10％牛血清白蛋白，將沉淀使用復溶溶液復溶，復溶溶液為10％牛血清白蛋白。

將膠體金標記的生物素單克隆抗體以16～17μL/cm速度鋪在6mm×150mm金墊上。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條，將膠體金與0.2M碳酸鉀溶液混合得到金標緩沖液，其中，膠體金的金顆粒為40nm。

0.2M碳酸鉀溶液與膠體金的混合比例為1～5：1000。

根據本發明具體實施方式的通用型多核酸產物檢測膠體金試紙條的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)將生物素單克隆抗體加入到金標緩沖液中，加入封閉液，混勻，離心,得到沉淀，將沉淀復溶得到膠體金標記的生物素單克隆抗體，并負載于基質上，干燥，得到膠體金墊；