[發明專利]免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法

在審

• 申請號: 202110029582.6
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112834742A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 李勇;丁少華;段生寶;王紅梅;魏雙施;陳曄洲;田晶晶;王玉玨
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/553;G01N33/576;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 張川

1.一種免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)預先配置化學發光底物、分離介質以及反應物，配置使得化學發光底物、分離介質、反應物的密度依次減小，且反應物中具有偶聯有磁微粒的復合物；

2)向檢測管中加入預先配置的化學發光底物；

3)沿側壁向檢測管中繼續加入分離介質，使得分離介質分層浮于化學發光底物上方；

4)向檢測管中繼續加入反應物，使得反應物分層浮于分離介質上方；

5)反應結束后，在檢測管外側施加由上至下的磁力，將反應物中的磁微粒及與磁微粒上結合的物質一起拖拽至化學發光底物區域中；

6)撤去磁力，采用化學發光檢測儀器檢測化學發光底物區域的反應信號。

2.根據權利要求1所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，其中，所述分離介質為Percoll、Ficoll、Dextran、蔗糖中的一種或多種的混合物。

3.根據權利要求2所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，配置化學發光底物時，通過加入密度介質調節化學發光底物的密度。

4.根據權利要求3所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，所述密度介質為Percoll、Ficoll、Dextran、蔗糖中的一種或多種的混合物。

5.根據權利要求4所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，化學發光底物、分離介質、反應物的密度依次為1.06-1.15g/cm³、1.035-1.06g/cm³、1.0-1.03g/cm³，且化學發光底物、分離介質、反應物的密度依次減小。

6.根據權利要求5所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，利用該方法檢測丙肝抗體的步驟包括：

1)配置反應物：在EP管中，加入偶聯了丙肝抗體檢測抗原的磁微粒，然后加入待測樣本，孵育，加入堿性磷酸酶標記的檢測抗體，再孵育；

配置含有質量濃度15％的蔗糖的AMPPD溶液作為化學發光底物，配置含有質量濃度12％的蔗糖的PBS溶液作為分離介質；

2)向檢測管中加入步驟1)配置的化學發光底物；

3)沿檢測管的側壁在化學發光底物的上方緩慢加入步驟1)配置的分離介質；

4)將步驟1)配置得到的反應物沿檢測管的側壁加入到分離介質的上方；

5)待反應物反應結束后，在檢測管外側施加由上至下的磁力，將反應物中的磁微粒及與磁微粒結合的物質一起拖拽至化學發光底物區域中，孵育反應；

6)反應結束后，撤去磁力，采用化學發光檢測儀器檢測化學發光底物區域的光信號。

7.根據權利要求6所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，其中，化學發光底物、分離介質、反應物的密度依次為1.06-1.10g/cm³、1.035-1.05g/cm³、1.0-1.03g/cm³。

8.根據權利要求7所述的免清洗磁微粒化學發光免疫檢測方法，其特征在于，利用該方法檢測丙肝抗體的步驟包括：

1)配置反應物：在EP管中，加入100uL偶聯了丙肝抗體檢測抗原的磁微粒，然后加入50μL待測樣本，37℃孵育15min，加入100μL堿性磷酸酶標記的檢測抗體，再孵育15min；

配置含有質量濃度15％的蔗糖的AMPPD溶液作為化學發光底物，配置含有質量濃度10-12％的蔗糖的PBS溶液作為分離介質；

2)向檢測管中加入70μL步驟1)配置的化學發光底物；

3)沿檢測管的側壁在化學發光底物的上方緩慢加入100μL步驟1)配置的分離介質；

4)將100μL-250μL步驟1)配置得到的反應物沿檢測管的側壁加入到分離介質的上方，(步驟1中的孵育已經完成，這里可以直接拖拽至底物區)；

5)在檢測管外側施加由上至下的磁力，將反應物中的磁微粒及與磁微粒上結合的物質一起拖拽至化學發光底物區域中，孵育2-5min；

6)反應結束后，撤去磁力，采用化學發光檢測儀器檢測化學發光底物區域的光信號。