[發(fā)明專利]免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法

在審

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• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112834742A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李勇;丁少華;段生寶;王紅梅;魏雙施;陳曄洲;田晶晶;王玉玨
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/553;G01N33/576;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11369
• 代理人: 張川

本發(fā)明公開了一種免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法，包括以下步驟：1)預(yù)先配置化學(xué)發(fā)光底物、分離介質(zhì)以及反應(yīng)物；2)向檢測管中加入預(yù)先配置的化學(xué)發(fā)光底物；3)沿側(cè)壁向檢測管中繼續(xù)加入分離介質(zhì)；4)向檢測管中繼續(xù)加入反應(yīng)物；5)反應(yīng)結(jié)束后，在檢測管外側(cè)施加由上至下的磁力，將反應(yīng)物中的磁微粒及與磁微粒上結(jié)合的物質(zhì)一起拖拽至化學(xué)發(fā)光底物區(qū)域中；6)撤去磁力，采用化學(xué)發(fā)光檢測儀器檢測化學(xué)發(fā)光底物區(qū)域的反應(yīng)信號。本發(fā)明提供的免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法，減少了免疫反應(yīng)中的洗滌步驟，縮短了檢測時(shí)間，可減少因清洗分離步驟引入的誤差，能提高檢測的準(zhǔn)確性，能保證測試的重復(fù)性和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物分析領(lǐng)域，特別涉及一種免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法。

背景技術(shù)

磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法是化學(xué)發(fā)光免疫分析法與磁性微粒載體技術(shù)相結(jié)合的一種檢測方法，它利用磁微粒具有超順磁性、成本低、能耗少和無污染等特點(diǎn)，將待測物抗原(抗體)包被磁微粒形成磁微粒-免疫復(fù)合物，發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記待測物抗原(抗體)制備標(biāo)記結(jié)合物，通過免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-標(biāo)記抗原(抗體)復(fù)合物，發(fā)光強(qiáng)度與待測物抗體(抗原)的含量成正比。由于懸浮性磁微粒作為載體具有較高的比表面積，能夠更為充分地與樣品反應(yīng)，加之外加磁場的靈活應(yīng)用，較酶標(biāo)板載體具有更高的靈敏度和特異性、更快的檢測速度和更好的重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，因此磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法日益受到人們的青睞，在生命科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)以及環(huán)境、食品、藥物等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

在磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測過程中，抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后，需要加入清洗液清洗3～5次，從而去除未結(jié)合到磁微粒-免疫復(fù)合物的物質(zhì)。洗滌的過程容易影響了待檢物質(zhì)與標(biāo)記物質(zhì)之間的結(jié)合/解離平衡，會(huì)減少標(biāo)記物標(biāo)記的被分析物，導(dǎo)致檢測限提高。當(dāng)反應(yīng)體系中使用的檢測抗體的親和性比較低時(shí)，這一現(xiàn)象則更為突出；繁瑣、費(fèi)時(shí)的洗滌過程也更容易出錯(cuò)，產(chǎn)生有潛在傳染性的廢棄物，清洗分離的步驟是誤差產(chǎn)生的最主要來源。因此，清洗的效果直接影響磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性好、特異性等。所以，開發(fā)無需分離或者減少分離次數(shù)的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測方法對于提高檢測的準(zhǔn)確性、重復(fù)性等都具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種免清洗磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法，包括以下步驟：

1)預(yù)先配置化學(xué)發(fā)光底物、分離介質(zhì)以及反應(yīng)物，配置使得化學(xué)發(fā)光底物、分離介質(zhì)、反應(yīng)物的密度依次減小，且反應(yīng)物中具有偶聯(lián)有磁微粒的復(fù)合物；

2)向檢測管中加入預(yù)先配置的化學(xué)發(fā)光底物；

3)沿側(cè)壁向檢測管中繼續(xù)加入分離介質(zhì)，使得分離介質(zhì)分層浮于化學(xué)發(fā)光底物上方；

4)向檢測管中繼續(xù)加入反應(yīng)物，使得反應(yīng)物分層浮于分離介質(zhì)上方；

5)反應(yīng)結(jié)束后，在檢測管外側(cè)施加由上至下的磁力，將反應(yīng)物中的磁微粒及與磁微粒上結(jié)合的物質(zhì)一起拖拽至化學(xué)發(fā)光底物區(qū)域中；

6)撤去磁力，采用化學(xué)發(fā)光檢測儀器檢測化學(xué)發(fā)光底物區(qū)域的反應(yīng)信號。

優(yōu)選的是，其中，所述分離介質(zhì)為Percoll、Ficoll、Dextran、蔗糖中的一種或多種的混合物。

優(yōu)選的是，配置化學(xué)發(fā)光底物時(shí)，通過加入密度介質(zhì)調(diào)節(jié)化學(xué)發(fā)光底物的密度。

優(yōu)選的是，所述密度介質(zhì)為Percoll、Ficoll、Dextran、蔗糖中的一種或多種的混合物。

優(yōu)選的是，化學(xué)發(fā)光底物、分離介質(zhì)、反應(yīng)物的密度依次為1.06-1.15g/cm³、1.035-1.06g/cm³、1.0-1.03g/cm³，且化學(xué)發(fā)光底物、分離介質(zhì)、反應(yīng)物的密度依次減小。