[發明專利]一種硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法

有效

• 申請號: 202110029545.5
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN114316079B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 莊莉;林燦芬;莊正;楊貴芹
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）懸浮：將硫還原地桿菌的生物膜用濃度為體積比0.9%的NaCl溶液懸浮，得到生物膜懸浮液；

（2）提取和去蛋白：將生物膜懸浮液采用EDTA法粗提取，得到的粗提液采用Sevag法去除蛋白質；

（3）分離胞外多糖：加入乙醇，醇沉，離心，將沉淀物中加入去離子水，重懸浮，得到胞外多糖溶液；

（4）純化：將胞外多糖溶液采用超濾管過濾，離心，得到硫還原地桿菌胞外多糖；

所述的硫還原地桿菌為硫還原地桿菌（Geobacter?sulfurreducens）PCA；

步驟（2）中所述的EDTA法粗提取是加入與生物膜懸浮液等體積的2%Na2-EDTA，混勻，4℃放置4h，5000g、4℃下離心20min，取上清液，過濾，得到粗提液；所述過濾為采用孔徑為0.22μm的濾膜過濾。

2.根據權利要求1?所述的硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法，其特征在于，步驟（2）中所述Sevag法去除蛋白質：將由氯仿和正丁醇以4：1?的體積比配制的Sevag液與粗提液按1：4?的體積比混合，劇烈振蕩30min，6000r/min離心10min，取上層水層；重復用Sevag法除蛋白5次，直至蛋白質被去除80%。

3.根據權利要求1所述的硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法，其特征在于，

步驟（3）中所述乙醇用量為體系中濃度為體積比80%；

步驟（3）中所述醇沉為4℃醇沉24h；

步驟（3）中所述離心為6000r/min，離心10min；

步驟（3）中所述去離子的用量為5mL。

4.根據權利要求1所述的硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法，其特征在于，

步驟（4）中所述超濾管為Millipore?3?KD?超濾管；

步驟（4）中所述離心為5000g、4℃下離心1h；

步驟（4）中所述過濾和所述離心的步驟重復3-5次，每次采用去離子水混合濾液。

5.根據權利要求1所述的硫還原地桿菌胞外多糖的提取純化方法，其特征在于，步驟（1）中所述生物膜采用微生物燃料電池培養得到。