[發(fā)明專(zhuān)利]一種離子交換層析介質(zhì)的清洗方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110026707.X
• 申請(qǐng)日: 2021-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112774254A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬可;朱衛(wèi)華;李爽;胡國(guó)偉;杜琳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京智飛綠竹生物制藥有限公司;重慶智飛生物制品股份有限公司;安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): B01D15/42
• 分類(lèi)號(hào): B01D15/42
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種離子交換層析介質(zhì)的清洗方法。該方法用于細(xì)菌莢膜多糖純化層析工序，陰離子交換介質(zhì)DEAE清洗，使層析介質(zhì)較好的再生與恢復(fù)，提高了層析的效率，延長(zhǎng)了層析介質(zhì)使用壽命，降低使用成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種離子交換層析介質(zhì)的清洗方法。

背景技術(shù)

離子交換層析是以離子交換劑為固定相,以特定的含離子的溶液為流動(dòng)相,利用離子交換劑對(duì)需要分離的各種多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合力的差異，而將混合物中不同物質(zhì)進(jìn)行分離的層析技術(shù)。離子交換層析的本質(zhì)是目標(biāo)物和介質(zhì)功能配基之間的靜電相互作用降,常規(guī)分離條件選擇的依據(jù)是等電點(diǎn)參數(shù)。

在生物制藥的分離純化過(guò)程中，培養(yǎng)的物料通過(guò)層析介質(zhì)分離純化，得到符合要求的目標(biāo)產(chǎn)品。同時(shí)，物料中的雜質(zhì)也污染了層析介質(zhì)。這些污染物包括：宿主的蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)、培養(yǎng)過(guò)程中的代謝產(chǎn)物、內(nèi)毒素、雜菌以及可能的層析系統(tǒng)的泄漏、試劑中的雜質(zhì)。這些污染物在下一次的分離純化中將污染目標(biāo)產(chǎn)品。所以必須去除或?qū)⑵浣档偷桨踩健＿@就是層析介質(zhì)的清洗過(guò)程。如果想要延長(zhǎng)介質(zhì)的使用壽命就必須使用較強(qiáng)烈的清洗條件清洗層析介質(zhì)。例如使用氫氧化鈉或優(yōu)化清洗劑的條件等。

由于生物樣品成分非常復(fù)雜,各種大分子及其功能基團(tuán)的作用特性相差較遠(yuǎn)，特別是蛋白質(zhì)大分子物質(zhì)在固定相介質(zhì)表面的不可逆吸附和疏水結(jié)合作用，是造成柱效顯著降低、層析行為發(fā)生改變的主要原因。這種不可逆的結(jié)合用普通的淋洗方法難以除去,因而致使離子交換層析柱的再生與恢復(fù)十分困難。因而如何使層析柱得到有效再生對(duì)其分離純化效率至關(guān)重要。

現(xiàn)有的清洗方法，是用氫氧化鈉溶液清洗，或者用堿鹽混合液清洗，這些清洗方法并不能對(duì)所有雜質(zhì)都能有較好的清洗效果。因此，找到一種適合自己實(shí)驗(yàn)物料清洗方法可有效的提高分離純化效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種離子交換層析介質(zhì)的清洗方法。該方法用于細(xì)菌莢膜多糖純化層析工序，陰離子交換介質(zhì)DEAE清洗，使層析介質(zhì)較好的再生與恢復(fù)，提高了層析的效率，延長(zhǎng)了層析介質(zhì)使用壽命，降低使用成本。

本發(fā)明所述的清洗方法，是在離子交換層析工序結(jié)束后，對(duì)介質(zhì)進(jìn)行清洗。

本發(fā)明所述的的清洗方法，包括以下步驟：

(1)先用氯化鈉溶液清洗，再用氫氧化鈉溶液清洗；或者直接用堿鹽混合液清洗，

(2)用酸鹽混合液清洗。

其中，步驟(1)氯化鈉溶液的濃度為0.5～2.0mol/L，

其中，步驟(1)氫氧化鈉溶液的濃度為0.1～2.0mol/L，

其中，步驟(1)堿鹽混合液是指0.5～2.0mol/L氯化鈉、0.1～2.0mol/L氫氧化鈉混合溶液，

其中，步驟(2)酸鹽混合液是指0.5～2.0mol/L氯化鈉、0.5～2.0mol/L醋酸混合溶液。

其中，步驟(1)的氯化鈉溶液清洗條件為清洗0.5～2個(gè)柱體積(CV)或與介質(zhì)接觸至少10～30分鐘。

其中，步驟(1)的氫氧化鈉溶液清洗條件為清洗1～3CV，同時(shí)滿足介質(zhì)接觸至少0.5～2小時(shí)。

其中，步驟(1)的堿鹽混合液清洗條件為清洗1～3CV，同時(shí)滿足堿鹽混合液與介質(zhì)接觸0.5～2小時(shí)。

其中，步驟(2)的清洗條件為清洗1～2CV，同時(shí)滿足酸鹽混合溶液與介質(zhì)接觸0.5～2小時(shí)。

本發(fā)明所述的清洗方法，包括如下步驟：

(1)用0.5～2.0mol/L氯化鈉溶液清洗層析柱，清洗0.5～2柱體積(CV)，控制流速使氯化鈉溶液與介質(zhì)接觸至少10～30分鐘。